1.高产D‑泛酸的基因工程菌，由如下方法构建获得：（1）以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）为底盘菌，将其基因组中的coaA基因原始起*

始密码子GTG替换为起始密码子TTG，得到工程菌Bacillus subtilis （coaA），记为DPA1；

*

（2）将工程菌DPA1基因组中的coaX基因敲除，得到工程菌Bacillus subtilis（coaA ΔcoaX），记为DPA2；

（3）将工程菌DPA2基因组中的ilvE基因的原始启动子替换为弱启动子PresD，构建菌株* *

Bacillus subtilis （coaA ΔcoaXilvE），记为DPA3；

*

（4）将工程菌DPA3基因组中的ilvK基因敲除，构建菌株Bacillus subtilis （coaA Δ*

coaXilvE ΔilvK） ，记为DPA4；

*

 （5）将工程菌DPA4基因组中的poxB基因敲除，构建菌株Bacillus subtilis （coaA Δ*

coaXilvE ΔilvKΔpoxB） ，记为DPA5；

*

（6）将工程菌DPA5基因组中的lctE基因敲除，构建菌株Bacillus subtilis （coaA Δ*

coaXilvE ΔilvKΔpoxBΔlctE） ，记为DPA6；

（7）将工程菌DPA6基因组中的panB基因的原始启动子替换为强启动子PsrfA，构建菌株* * *

Bacillus subtilis （coaA ΔcoaXilvE ΔilvKΔpoxBΔlctEpanB），记为DPA7；

（8）在工程菌DPA7基因组中过表达panB及panC基因，构建菌株Bacillus subtili * * *

（coaA ΔcoaXilvE ΔilvKΔpoxBΔlctEpanB ‑panBC），记为DPA8，即为所述的高产D‑泛酸的基因工程菌。

2.构建权利要求1所述基因工程菌的方法，所述方法包括：（1）以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）为底盘菌，应用Cre/loxP基因编辑方法，将其基因组中的coaA基因原始起始密码子GTG替换为起始密码子TTG，得到工程菌Bacillus *

subtilis （coaA），记为DPA1；

（2）应用Cre/loxP基因编辑方法，将工程菌DPA1基因组中的coaX基因敲除，得到工程菌*

Bacillus subtilis（coaA ΔcoaX），记为DPA2；

（3）应用Cre/loxP基因编辑方法，将工程菌DPA2基因组中的ilvE基因的原始启动子替* *

换为弱启动子PresD，构建菌株Bacillus subtilis （coaA ΔcoaXilvE），记为DPA3；

（4）应用Cre/loxP基因编辑方法，将工程菌DPA3基因组中的ilvK基因敲除，构建菌株* *

Bacillus subtilis （coaA ΔcoaXilvE ΔilvK） ，记为DPA4；

 （5）应用Cre/loxP基因编辑方法，将工程菌DPA4基因组中的poxB基因敲除，构建菌株* *

Bacillus subtilis （coaA ΔcoaXilvE ΔilvKΔpoxB） ，记为DPA5；

 （6）应用Cre/loxP基因编辑方法，将工程菌DPA5基因组中的lctE基因敲除，构建菌株* *

Bacillus subtilis （coaA ΔcoaXilvE ΔilvKΔpoxBΔlctE） ，记为DPA6；

（7）应用Cre/loxP基因编辑方法，将工程菌DPA6基因组中的panB基因的原始启动子替* *

换为强启动子PsrfA，构建菌株Bacillus subtilis （coaA ΔcoaXilvE ΔilvKΔpoxBΔ*

lctEpanB），记为DPA7；

 （8）将来源于谷氨酸棒杆菌的panB及panC基因构建到pMA5质粒上得到pMA5‑panB‑*

panC，在工程菌DPA7基因组中过表达panB及panC基因，构建菌株Bacillus subtili （coaA* *

ΔcoaXilvE ΔilvKΔpoxBΔlctEpanB ‑panBC），记为DPA8，即为所述的高产D‑泛酸的基因工程菌。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述底盘菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ATCC 6633。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述启动子PresD的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述启动子PsrfA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.权利要求1所述基因工程菌在微生物发酵制备D‑泛酸中的应用。

6.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述应用为：将所述基因工程菌菌株接种于发酵培养基中，于25 32℃、180 300 rpm条件下进行发酵培养48 60h，发酵结束后取发酵液上~ ~ ~

清分离纯化得到所述D‑泛酸。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述发酵培养基组成如下：葡萄糖 10 30 g/~

L、硫酸铵10~20 g/L、KH2PO4 0.1~1.5 g/L、硫酸镁0.1~2.0 g/L、酵母粉1~5 g/L、β‑丙氨酸1

5 g/L、碳酸钙10 20 g/L、0.5 2mL微量元素溶液，溶剂为水，pH自然；微量元素溶液组成~ ~ ~

为：10 g/L CaCl2，10 g/L FeSO4•7H2O，1 g/L ZnSO4•7H2O， 0.2 g/L CuSO4，0.02 g/L NiCl2•7H2O，溶剂为去离子水。