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专利号: 2022106251633
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种基于ilvC突变体高产D‑泛酸的基因工程菌,由如下方法构建:运用基因编辑技术,对ilvC基因413号密码子进行定点突变,将异亮氨酸突变为丙氨酸,并通过中高拷贝质I413A粒pTrc99a使其在底盘菌DPAN15中过表达,得到DPAN15/pTrc99a‑ilvC ,即所述基于ilvC突变体高产D‑泛酸的基因工程菌;所述底盘菌DPAN15的构建方法在专利 CN113278569A中I413A公开,所述ilvC 核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

2.构建权利要求1所述基因工程菌的方法,所述方法包括:

(1)运用基因编辑技术,对ilvC基因413号密码子进行定点突变,将异亮氨酸突变为丙I413A氨酸,得到ilvC ;

I413A

(2)运用基因编辑技术,通过中高拷贝质粒pTrc99a使ilvC 在底盘菌DPAN15中过表I413A达,得到DPAN15/pTrc99a‑ilvC ,即所述基于ilvC突变体高产D‑泛酸的基因工程菌。

3.权利要求1所述基因工程菌在微生物发酵制备D‑泛酸中的应用。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述应用为:将所述基因工程菌菌株接种至含有Kan抗性的发酵培养基中,25 30 ℃、100 200 rpm条件下进行发酵培养至OD600=0.8 1.0~ ~ ~时,添加终浓度为0.2mM的IPTG,之后转至30℃,180 rpm下继续培养48h,发酵结束后取发酵液上清分离纯化得到D‑泛酸。

5.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述发酵培养基组成如下:葡萄糖 24 g/L、(NH4)2SO4 12 g/L、KH2PO4 1 g/L、MgSO4 0.5 g/L、酵母提取物 2 g/L、CaCO3 10 g/L,1 ml/L微量元素溶液,溶剂为去离子水,pH值自然;微量元素溶液组成为:10 g/L CuCl2、10 g/L FeSO4·7H2O、1 g/L ZnSO4·7H2O、0.20 g/L CuSO4、0.02 g/L NiCl2·7H2O,溶剂为去离子水。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述基因工程菌发酵前,先接种至LB培养基中,于37℃、200 rpm的摇床上过夜培养,之后以体积浓度2%接种量接种到发酵培养基中进行发酵培养。