利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2024117554751
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种高产D‑泛酸的基因工程菌的构建方法,其特征在于,包括:运用CRISPR‑Cas9介导的基因编辑技术,在底盘菌基因组中:强化pabC基因表达;增加gcvTHP基因拷贝数并强化表达;弱化nac基因表达;强化serA基因、glyA基因的表达并利用Apt2#82核糖体开关动态调控serA基因、glyA基因的表达;增加panB基因拷贝数并强化表达,制得高产D‑泛酸的基因工程菌。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述强化pabC基因表达的方法包括:将pabC基因的原位启动子替换为Trc启动子。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述增加gcvTHP基因拷贝数并强化表达的方法包括:在yeej假基因位点增加受Trc启动子调控的gcvTHP基因拷贝数。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述弱化nac基因表达的方法包括,将nac基因起始密码子突变为TTG。

5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述强化serA基因、glyA基因的表达并利用Apt2#82核糖体开关动态调控serA基因、glyA基因的表达的方法包括:分别将serA基因、glyA基因的原位启动子替换为Trc启动子,并分别在Trc启动子后插入Apt2#82核糖体开关。

6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述增加panB基因拷贝数并强化表达的方法包括:在tfad假基因位点增加受PpanB启动子调控的panB基因拷贝数。

7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述底盘菌为:E.coliW3110, Trc‑EcilvD* GTG GTG TTG/BspanBA* /CgpanC* /alsS* /BspanB* /nac /ΔP345ptsH /gltA /gltA  /Trc‑PpfkB/Trc‑gcvTHP/lafU::folP/yeeP::Trc‑Apt2#82‑serA /Apt2#82glyA‑ PpanB ‑panB /gapC::Trc‑alsS*。

8.通过权利要求1 7任一所述的方法构建得到的高产D‑泛酸的基因工程菌。

~

9.如权利要求8所述的高产D‑泛酸的基因工程菌,其特征在于,所述高产D‑泛酸的基因GTG工程菌为:E.coliW3110, Trc‑EcilvD* /BspanBA* /CgpanC* /alsS* /BspanB* /nac /GTG TTGΔP345ptsH /gltA /gltA  /Trc‑PpfkB/Trc‑gcvTHP/lafU::folP/yeeP::Trc‑Apt2#82‑TTGserAglyA‑PpanB‑panB /gapC::Trc‑alsS*/Trc‑pabC/yeej::trc‑gcvTHP/nac  /Trc‑Apt2#82‑serA /Trc‑Apt2#82glyA /tfad::Trc‑panB。

10.如权利要求8所述的高产D‑泛酸的基因工程菌在微生物发酵制备D‑泛酸中的应用。