1.一株纳豆激酶真核高效表达双启动子系统重组基因工程菌，其特征在于，所述纳豆激酶真核高效表达双启动子系统重组基因工程菌为komagataella phaffii LNF013，于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO.22081。

2.一株纳豆激酶真核高效表达双启动子系统重组基因工程菌的构建方法，其特征在于，方法包括如下步骤：

1）GAP启动子基因片段的获得：以pGAPZα‑A质粒为模板，以Primer5和Primer6为引物，通过PCR反应，获得两端添加酶切位点Kpn I和Not I的GAP启动子基因片段；

Primer5：GGGGTACCTTTTTGTAGAAATGTCTTGGTGTCPrimer6：ATAAGAATGCGGCCGCATAGTTGTTCAATTGATTGAA

2）pGAPZα‑A‑NKt2载体质粒的获得：

2.1)以NKt基因片段为模板，Primer 1和Primer 3为引物通过重叠延伸PCR扩增突变的上游片段NKt194F；以NKt基因片段为模板，Primer 4和Primer 2为引物通过重叠延伸PCR扩增下游片段NKt194R，通过T4连接酶，16℃过夜连接，将NKt194F和NKt194R连接合成NKt194突变片段；

Primer 1：5’‑GCGGAATTCGGCCGGAAAAAGCAGTAC‑3’Primer 3：5’‑AGCCATTACATCAAGCTCTGGTCCTACGCTGGAGAATG‑3’Primer 4：5’‑CATTCTCCAGCGTAGGTCCAGAGCTTGATGTAATGGCT‑3’Primer 2：5’‑GCGCTCGAGTTGTGCAGCTGCTTGTAC‑3’

2.2）根据毕赤酵母X33密码子偏爱性对NKt194突变片段基因进行密码子优化和合成，获得优化的基因片段NKt2；NKt2基因序列如SEQ ID NO.2所示；

2.3）将NKt2和表达质粒PGAPZα‑A分别在酶切位点EcoRⅠ和XhoⅠ进行双酶切，然后T4连接酶连接，构建重组载体PGAPZα‑A‑ NKt2；

2.4）以pGAPZα‑A‑NKt2为模板，以Primer7和Primer8为引物，通过环PCR扩增，获得在pGAPZα‑A‑NKt2下游两端添加酶切位点Kpn I和Not I 的pGAPZα‑A‑NKt2载体质粒；

Primer7：ATAAGAATGCGGCCGCTTCGAAACGATGAGATTTCCTPrimer8：GGGGTACCATAGTTGTTCAATTGATTGAA；

3）构建pGAPZα‑A‑GAP‑GAP‑NKt2重组表达载体：将步骤1）获得的两端添加酶切位点Kpn I和Not I的GAP启动子基因片段和步骤2）获得的在pGAPZα‑A‑NKt2下游两端添加酶切位点Kpn I和Not I 的pGAPZα‑A‑NKt2载体质粒，通过双酶切连接，获得pGAPZα‑A‑GAP‑GAP‑NKt2重组表达载体；

4）转化：将pGAPZα‑A‑GAP‑GAP‑ NKt2重组表达载体转化到毕赤酵母X33中，获得重组基因工程菌。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤1）中，PCR反应的条件为：PCR反应体系：Primer 5 2μl，Primer 6 2μl，2×Es taq Master Mix 25μl，pGAPZα‑A质粒DNA 1μl，ddH2O补至总体系50μL；

PCR反应条件：94℃预变性2 min；94℃ 30s；55℃ 30s；72℃ 30s；25cycles；72℃延伸7 min；4℃ 10min。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤2）中，环PCR扩增的条件为：PCR反应体系：Primer 7 2μl，Primer 8 2μl，2×Es taq Master Mix 25μl，pGAPZα‑A‑ NKt2 DNA 1μl，ddH2O补至总体系50μL；

PCR反应条件：98℃预变性3min；98℃ 30s；56℃ 30s；72℃ 50s；25cycles；72℃延伸7 min；4℃ 10min。

5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤4）中，将pGAPZα‑A‑GAP‑GAP‑NKt2重组表达载体，先进行线性化后，再使用电转化法转化到毕赤酵母X33中。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，线性化体系为：pGAPZα‑A‑GAP‑GAP‑ NKt2 1μg，10×QuickCut Buffer 2μL，QuickCut Enzyme Bgl Ⅱ 1μL，ddH2O补至总体系20μL；反应条件为温度37℃，酶切时间为10min‑15 min。

7.权利要求1所述的一株纳豆激酶真核高效表达双启动子系统重组基因工程菌在表达纳豆激酶中的应用。