利索能及
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专利号: 2016109459712
申请人: 南通大学
专利类型:发明专利
专利状态:无效专利
更新日期:2025-11-13
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种下调真核基因表达的方法,其特征在于,包括如下几个步骤:

1)NgAgo基因的改造:在NgAgo基因序列末端引入一个或两个核定位序列,并在其3’端加入polyA、在5’端加入5’-UTR序列和启动子SP6/T7/T3序列,改造的NgAgo基因的序列为SEQ.ID.NO.1;

2)表达质粒的构建:改造的NgAgo基因序列和载体分别进行双酶切获取粘性末端的DNA序列、然后对DNA序列进行纯化回收,连接酶催化DNA序列并纯化回收获得表达质粒;

3)表达质粒经过线性化、体外转录、回收步骤获得Argonaute mRNA;

4)根据目的基因序列设计并合成5’-p-ss-DNA Oligo;

5)将Argonaute mRNA和5’-p-ss-DNA Oligo导入靶细胞中;

6)培养靶细胞至一定时间,观察细胞形态,通过PCR扩增目的基因,通过Sanger基因测序技术验证目的基因的突变情况,通过qRT-PCR检测目的基因的表达水平。

2.根据权利要求1所述的下调真核基因表达的方法,其特征在于,所述目的基因是真核生物基因。

3.根据权利要求1所述的下调真核基因表达的方法,其特征在于,所述靶细胞为真核生物细胞。

4.根据权利要求1所述的下调真核基因表达的方法,其特征在于,所述5’-p-ss-DNA Oligo序列的长度为20-27bp,其5'端带有磷酸基团。

5.根据权利要求1所述的下调真核基因表达的方法,其特征在于,所述载体pCS2+、pCS2、pcDNA3.1(+)或pcDNA3.1(-)中的一种。

6.一种下调真核基因表达的试剂盒,其特征在于,该试剂盒中含有摩尔比为1:1的Argonaute mRNA和5’-p-ss-DNA Oligo,或者含有摩尔比为1:100的Argonaute表达质粒和

5’-p-ss-DNA Oligo。