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专利号: 2021103657693
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一株分泌硝呋烯腙单克隆抗体的杂交瘤细胞株FQJ 5G11,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC,地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,分类命名为单克隆细胞株,保藏日期2020年9月27日,保藏编号CGMCC No.20784。

2.硝呋烯腙单克隆抗体,其特征在于:其由权利要求1所述保藏编号为CGMCC No.20784的杂交瘤细胞株FQJ 5G11分泌产生。

3.硝呋烯腙半抗原,其特征在于:其简称为NTV‑COOH,分子式如下:

4.硝呋烯腙半抗原的制备方法,其特征在于:以硝呋烯腙为原料,通过丁二酸酐引入羧基获得半抗原;取硝呋烯腙溶于无水吡啶中,加入丁二酸酐,回流反应,氮气吹干反应液得到硝呋烯腙衍生物,即为硝呋烯腙半抗原NTV‑COOH。

5.硝呋烯腙完全抗原,其特征在于:简称为NTV‑COOH‑KLH,分子式如下:

6.硝呋烯腙完全抗原的制备方法,其特征在于:硝呋烯腙半抗原NTV‑COOH、N‑羟基琥珀酰亚胺NHS溶解于无水N,N‑二甲基甲酰胺DMF中,搅拌进行反应,得到硝呋烯腙半抗原NTV‑COOH溶液;将1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC溶解于无水DMF后,加入到NTV‑COOH溶液中,搅拌进行反应,得到A液;将钥孔血蓝蛋白KLH用碳酸盐缓冲溶液CBS稀释,得到B液;将A液加入到B液中进行反应,得到反应液;用磷酸盐缓冲液PBS透析反应液,得到完全抗原NTV‑COOH‑KLH。

7.根据权利要求6所述硝呋烯腙完全抗原的制备方法,其特征在于步骤为:称取3.45mg硝呋烯腙半抗原NTV‑COOH,1.73mg N‑羟基琥珀酰亚胺NHS,溶解于300μL N,N‑二甲基甲酰胺DMF中,室温搅拌反应10min;再称取2.88mg 1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC,用100μL DMF充分溶解后,加入到NTV‑COOH溶液中,室温搅拌反应4‑6h,称为A液;取

6mg KLH,用0.01M碳酸盐缓冲液CBS稀释至3mg/mL,称为B液;逐滴将A液缓慢加入到B液中,室温反应过夜;然后用0.01M PBS溶液透析,除去未反应的小分子半抗原,得到硝呋烯腙完全抗原NTV‑COOH‑KLH。

8.硝呋烯腙包被原的制备方法,其特征在于:将硝呋烯腙半抗原NTV‑COOH、N‑羟基琥珀酰亚胺NHS溶解于无水N,N‑二甲基甲酰胺DMF中,室温搅拌反应,得到硝呋烯腙半抗原NTV‑COOH溶液;将1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC溶解于无水DMF后,加入到NTV‑COOH溶液中,室温搅拌进行反应,得到A2液;将鸡卵白蛋白OVA用浓碳酸盐缓冲液CBS稀释,得到B2液;将逐滴将A2液缓慢加入到B2液中进行反应,得到反应液;用PBS溶液透析反应液,除去未反应的小分子半抗原,得到硝呋烯腙包被原NTV‑COOH‑OVA。

9.根据权利要求8所述硝呋烯腙包被原的制备方法,其特征在于步骤为:将5.52mg硝呋烯腙半抗原NTV‑COOH、2.8mg N‑羟基琥珀酰亚胺NHS溶解于300μL无水N,N‑二甲基甲酰胺DMF中,室温搅拌反应10min,得到硝呋烯腙半抗原NTV‑COOH溶液;将4.6mg 1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC溶解于100μL无水DMF后,加入到NTV‑COOH溶液中,室温搅拌进行反应4‑6h,得到A2液;将6mg鸡卵白蛋白OVA用1mL浓度为0.01mmol/L的碳酸盐缓冲液CBS稀释,得到B2液;逐滴将A2液缓慢加入到B2液中进行反应,得到反应液;用PBS溶液透析反应液,除去未反应的小分子半抗原,得到硝呋烯腙包被原NTV‑COOH‑OVA。

10.根据权利要求2所述硝呋烯腙单克隆抗体的应用,其特征在于:建立硝呋烯腙含量的免疫检测方法,将其应用于食品安全检测中硝呋烯腙残留的分析检测。