1.一种植物多基因编辑的方法,其特征在于,将TRV2‑multiSG载体侵染过量表达Cas9蛋白的植株,得多基因编辑植株;
所述TRV2‑multiSG载体的构建方法,包括以下步骤:(1)合成sgRNA‑tRNA串联序列后,连接载体pCE2,得载体pCE2‑GT;所述sgRNA‑tRNA串联序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;利用TOPO克隆方法将所述sgRNA‑tRNA串联序列连接在载体pCE2上;
(2)以所述载体pCE2‑GT为模板,将不同的靶标序列分别插入到所述sgRNA‑tRNA串联序列的sgRNA和tRNA序列之间,得单元序列;使用基于II型核酸内切酶酶切和连接的“金门”克隆方法,将靶标基因的靶序列插入到每个单元序列的tRNA与sgRNA之间;所述II型核酸内切酶包括BsaI、AarI、BbsI、BsmAI或BsmBI;
(3)将若干个所述单元序列串联后插入到TRV2病毒载体中,得连接多个靶标序列的TRV2‑multiSG;将串联后的若干个单元序列插入到TRV2病毒载体的多克隆位点EcoRI与BamHI之间;在所述插入后,还包括质粒Sanger测序验证。