1.一种用于基因编辑柑橘属植物的sgRNA靶点序列,其特征在于,所述sgRNA靶点序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种包含权利要求1所述sgRNA靶点序列的重组载体,其特征在于,所述重组载体的基础质粒包括pBluescript‑AtU6‑gRNA。
3.权利要求2所述重组载体的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将基于权利要求1所述sgRNA靶点序列得到的sgRNA互补序列退火后连接至线性化的pBluescript‑AtU6‑gRNA载体的Bsa I‑HF酶切位点,得初级载体;
(2)利用Spe I和Nhe I双酶切所述初级载体,将切下的sgRNA cassette与经Spe I酶切、回收所得pCAMBIA1300‑pYAO:Cas9载体连接后,得重组载体。
4.权利要求1所述sgRNA靶点序列或权利要求2所述重组载体在提高柑橘基属植物因编辑效率中的应用。
5.权利要求1所述sgRNA靶点序列或权利要求2所述重组载体在基因编辑系统中的应用。
6.一种基于权利要求1所述sgRNA靶点序列或权利要求2所述重组载体的基因编辑系统构建基因编辑柑橘属植物的方法,其特征在于,包括以下步骤:将柑橘属植物的种子的胚珠进行诱导,得胚性愈伤组织;
利用权利要求2所述重组载体转化农杆菌后,侵染所述胚性愈伤组织,进行培养。
7.根据权利要求6所述方法,其特征在于,所述种子包括败育种子。
8.根据权利要求6所述方法,其特征在于,侵染时,所述转化农杆菌后所得的悬浊液的浓度为OD600=0.4~0.5;所述侵染的时间为20~25min。
9.根据权利要求6所述方法,其特征在于,所述培养包括共培养、筛选培养和植物再生培养;
所述共培养所用共培养培养基以MT培养基为基础培养基,还包括:0.5g/L麦芽提取物和100μM乙酰丁香酮;所述筛选培养所用筛选培养基以MT培养基为基础培养基,还包括:
0.5g/L麦芽提取物、100mg/L卡那霉素、400mg/L头孢霉素、50g/L麦芽糖和8g/L琼脂;所述筛选培养基的pH为5.8;所述植物再生培养所用伸长培养基EME1500以MT培养基为基础培养基,还包括:0.5g/L麦芽提取物、400mg/L头孢霉素、35g/L蔗糖和8g/L琼脂;所述伸长培养基EME1500的pH为5.8。