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专利号: 2021108717366
申请人: 赣南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于基因编辑系统构建基因编辑柑橘属植物的方法,其特征在于,包括以下步骤:将柑橘属植物的种子的胚珠进行诱导,得胚性愈伤组织;所述柑橘属植物为纽荷尔脐橙;所述种子为花后90d的败育种子;

利用重组载体转化农杆菌后,侵染所述胚性愈伤组织,进行培养;所述侵染时,所述转化农杆菌后所得的悬浊液的浓度为OD600=0.4~0.5;所述侵染的时间为20~25min;

所述重组载体包含核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的sgRNA靶点;

所述重组载体的构建方法包括以下步骤:

(1)将基于核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的sgRNA靶点序列得到的sgRNA互补序列退火后连接至线性化的pBluescript‑AtU6‑gRNA载体的Bsa I‑HF酶切位点,得初级载体;所述sgRNA互补序列的2条序列分别如SEQ ID NO:2及SEQ IDNO:3所示;

(2)利用Spe I和Nhe I双酶切所述初级载体,将切下的sgRNA cassette与经Spe I酶切、回收所得pCAMBIA1300‑pYAO:Cas9载体连接后,得重组载体。

2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述培养包括共培养、筛选培养和植物再生培养;

所述共培养所用共培养培养基以MT培养基为基础培养基,还包括:0.5g/L麦芽提取物和100μM乙酰丁香酮;所述筛选培养所用筛选培养基以MT培养基为基础培养基,还包括:

0.5g/L麦芽提取物、100mg/L卡那霉素、400mg/L头孢霉素、50g/L麦芽糖和8g/L琼脂;所述筛选培养基的pH为5.8;所述植物再生培养所用伸长培养基EME1500以MT培养基为基础培养基,还包括:0.5g/L麦芽提取物、400mg/L头孢霉素、35g/L蔗糖和8g/L琼脂;所述伸长培养基EME1500的pH为5.8。