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专利号: 202110510966X
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种基因编辑载体,其特征在于,包括:顺序排列的马铃薯Y病毒属病毒从5’‑UTR区至衣壳蛋白区的序列、gRNA、插入序列和3’‑UTR区;

所述插入序列任选如下任一:

i)编码所述马铃薯Y病毒属病毒的病毒衣壳蛋白的核酸序列;

ii)如i)所示核酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸后,仍可以和3’‑UTR区的核酸序列形成病毒复制所需的完整RNA元件的核酸序列。

2.根据权利要求1所述的基因编辑载体,其特征在于,所述衣壳蛋白区的序列经过密码子优化使其核酸序列发生变化;

优选地,优化后的序列和优化前的序列相比没有大于30个碱基的连续的完全一致的同源片段。

3.根据权利要求1或2所述的基因编辑载体,其特征在于,当所述插入序列选自ii)时,所述插入序列通过如下流程处理得到:

将所述编码所述马铃薯Y病毒属病毒的病毒衣壳蛋白的核酸序列以100‑300nt分为多段,任意去除其中至少一段核酸序列序列,将留下的核酸序列在所述载体中进行病毒复制能力和/或基因编辑效率的评估;若可以顺利进行所述马铃薯Y病毒属病毒的复制和基因编辑,则所述留下的核酸序列即为所述插入序列。

4.根据权利要求1‑3任一项所述的基因编辑载体,其特征在于,在所述衣壳蛋白区的序列和所述gRNA之间还包括可以自我切割或被细胞内核酸内切酶切割的核酸序列,优选为编码核酶的核酸序列或Pre‑tRNA。

5.根据权利要求4所述基因编辑载体,其特征在于,所述核酶为突变型柱头状核酶;优选地,所述突变型柱头状核酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

6.根据权利要求1所述的基因编辑载体,其特征在于,所述马铃薯Y病毒属病毒包括马铃薯Y病毒(Potato virus Y)、大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus)、菜豆普通花叶病毒(Bean common mosaic virus)、菜豆黄花叶病毒(Bean yellow mosaic virus)、黑眼豇豆花叶病毒(Blackeye cowpea mosaic virus)、豇豆蚜传花叶病毒(Cowpea aphid‑borne mosaic virus)、豇豆绿色脉带病毒(Cowpea green vein banding virus)、瓜尔豆无症病毒(Guar symptomless virus)、绿豆花叶病毒(Mungbean mosaic virus)、豌豆种传花叶病毒(Pea seedborne mosaic virus)、花生斑驳病毒(Peanut mottle virus)、花生条纹病毒(Peanut stripe virus)、玉米矮花叶病毒(Maize dwarf mosaic virus)、苜蓿花叶病毒(Alfalfa mosaic virus)、西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus)、甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus)、小麦线条花叶病毒(Wheat streak mosaic virus)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus)、李痘病毒(Plum pox virus)、向日葵花叶病毒(Sunflower mosaic virus)中的一种或多种。

7.根据权利要求1所述的基因编辑载体,其特征在于,所述基因编辑载体包括如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。

8.一种基因编辑方法,其特征在于,包括:使用权利要求1‑7任一项所述基因编辑载体对目标植物进行基因编辑;

所述目标植物包括大豆、菜豆、豇豆、绿豆、烟草、西瓜、马铃薯、苜蓿、甘薯、玉米、小麦或大麦中的一种或多种。

9.根据权利要求8所述的基因编辑方法,其特征在于,包括:通过农杆菌浸润、基因枪轰击或摩擦接种法,将所述基因编辑载体转化至所述目标植物中。

10.权利要求1‑7任一项所述的基因编辑载体,或权利要求8或9所述的基因编辑方法在改良植物表型中的应用;所述植物表型包括:产量、抗病性、抗逆性、种子品质和果实品质中的一种或多种。