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专利号: 2020101060876
申请人: 福建省农业科学院植物保护研究所
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-27
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种三七黑斑病菌的LAMP检测引物,其特征在于,所述引物包括如下:

F3:5’‑TGGAGTCAGGATGAGGTCG‑3’;

B3:5’‑GATCTGGCAGTGGCTTGAG‑3’;

FIP:5’‑CCTCCTCTTCGGCGTCTAGGTA‑AACAAGCTACTTACGGCTGG‑3’;

BIP:5’‑TGGAGGAGTGGCGGGAGATG‑CACCCTCAGTTGATCGCTC‑3’ 。

2.权利要求1所述引物在三七黑斑病检测中的应用。

3.一种利用权利要求1所述引物进行三七黑斑病菌的LAMP检测方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)待测样品DNA的提取:按照CTAB法或采用商品化试剂盒提取待测样品基因组DNA;

(2)LAMP扩增反应:以步骤(1)提取的待测样品DNA为模板,利用权利要求1所述的引物进行LAMP反应,LAMP检测反应体系为25 μL,包括5 μM引物F3和B3各1.0 μL,40 μM引物FIP和BIP各1.0 μL,LAMP反应混合液12.5μL,8 U Bst聚合酶1.0 μL,DNA模板1.0 μL,用灭菌超纯水补足至25μL;LAMP反应条件:64 ℃温育40 min;LAMP反应混合液由以下组分组成:40 mM Tris‑HCl,20 mM (NH4)2SO4,20 mM KCl,16 mM MgSO4,1.6 mol/L甜菜碱,2.0 mM dNTPs,0.2wt.% Trion X‑100;

(3)反应结果的测定:采用荧光染料目测观察法进行测定,待LAMP反应结束后,在LAMP反应的扩增产物中加入显色剂SYBR greenⅠ 1.0 μL,在正常光照下,显色结果观察到绿色荧光,并且在波长为365nm的紫外光照射下呈白色浑浊沉淀状的判断为阳性,即存在三七黑斑病菌,在正常光照下,显色结果观察到橙色或橘黄色,并且在波长为365nm的紫外光照射下呈无色透明状的判断为阴性,即不存在三七黑斑病菌。