1.一种检测三七锈腐病菌的LAMP引物组,其特征在于,所述引物组包括如下:
F3:5’‑AAAGCTCGGGACTTCAACC‑3’;
B3:5’‑TGCTCGCTAGAGATGGTCTG‑3’;
FIP:5’‑CTTACGCACTGGCCGGTCTG‑TTTTGGGACAAGATGGCTGA‑3’;
BIP:5’‑CCTCTTCAACGATCCGACGTGC‑GCACCGATTTGGTTACCCTA‑3’。
2.权利要求1所述的LAMP引物组在检测三七锈腐病菌中的应用。
3.一种利用权利要求1所述的引物组用于检测三七锈腐病菌的LAMP检测方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)待测样品DNA的提取:按照CTAB法或采用商品化试剂盒提取待测样品基因组DNA;
(2)LAMP扩增反应:以步骤(1)提取的待测样品DNA为模板,利用权利要求1所述的引物组进行LAMP反应,LAMP检测反应体系为25 μL,包括5 μM引物F3和B3各1.0 μL,40 μM引物FIP和BIP各1.0 μL,LAMP反应混合液12.5μL,8 U Bst聚合酶1.0 μL,DNA模板1.0 μL,用灭菌超纯水补足至25μL;LAMP反应条件:63℃温育40 min;所述LAMP反应混合液中含40 mM Tris‑HCl,20 mM (NH4)2SO4,20 mM KCl,16 mM MgSO4,1.6 mol/L甜菜碱,2.0 mM dNTPs,
0.2wt.% Trion X‑100;
(3)反应结果的测定:采用荧光染料目测观察法进行测定,待LAMP反应结束后,在LAMP反应的扩增产物中加入显色剂SYBR greenⅠ 1.0 μL,在正常光照下,显色结果观察到绿色荧光,并且在波长为365nm的紫外光照射下呈白色浑浊沉淀状的判断为阳性,即存在三七锈腐病菌,在正常光照下,显色结果观察到橙色或橘黄色,并且在波长为365nm的紫外光照射下呈无色透明状的判断为阴性,即不存在三七锈腐病菌。