1.一种暗纹东方鲀原代肝细胞分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)选取暗纹东方鲀稚鱼，无菌解剖摘取肝脏，清洗，剪碎；

(2)将剪碎的肝脏利用胶原酶Ⅱ消化液消化，过滤，离心，沉淀中加入裂解液处理后得细胞悬液，然后加入到分离液中，离心去除杂质；

(3)向沉淀中加预温过的完全培养基，混匀，补足完全培养基，进行培养。

2.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀原代肝细胞分离及培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述暗纹东方鲀稚鱼，是体长为2±0.5cm，体重为2±0.3g的未经饲料转化，用红虫或卤虫饲养的稚鱼，取肝组织前饲养在盐度为1-3的水环境中，饥饿处理。

3.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀原代肝细胞分离及培养方法，其特征在于，步骤(2)中所述胶原酶Ⅱ消化液的浓度为0.5-2mg/ml，加入量为每克肝组织加入7-9ml，25-28℃消化1.5-3h。

4.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀原代肝细胞分离及培养方法，其特征在于，步骤(2)中所述沉淀中加入红细胞裂解液处理，方法为：在沉淀中加入红细胞裂解液，混匀，离心，得细胞沉淀，向沉淀中加入基础培养基，混匀，得细胞悬液。

5.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀原代肝细胞分离及培养方法，其特征在于，步骤(2)中所述分离液为60％percoll分离液，细胞悬液与percoll分离液的体积比为3:(4-6)。

6.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀原代肝细胞分离及培养方法，其特征在于，步骤(3)中所述完全培养基成分包括：DMEM基础培养基中加入胎牛血清和暗纹东方鲀血清，DMEM基础培养基、胎牛血清及暗纹东方鲀血清体积比为12-15：4-5：1-3，并且加入包含青霉素和链霉素的双抗溶液和谷氨酰胺溶液，调pH至为7.6～7.8之间。

7.根据权利要求6所述的暗纹东方鲀原代肝细胞分离及培养方法，其特征在于，每

100ml完全培养基中加入110μl双抗溶液和0.5～1.5ml L-谷氨酰胺溶液，双抗溶液中含有青霉素100Units/ml和链霉素100μg/ml，谷氨酰胺溶液的浓度为20mmol/L。