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专利号: 2019101839079
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种暗纹东方鲀原代鳃细胞培养方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)取暗纹东方鲀鳃组织,利用含有双抗青霉素和链霉素的浸泡液浸泡,清洗液清洗后,切割鳃丝;

(2)使用胰蛋白酶消化鳃丝,过滤,离心,取沉淀;随后使用红细胞裂解液去除红细胞,离心,得细胞沉淀;

(3)细胞沉淀中加完全培养液,吹打细胞,补足完全培养液,进行培养。

2.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀原代鳃细胞培养方法,其特征在于,所述暗纹东方鲀,取鳃组织前饲养在盐度为5~10的水环境中3~5天。

3.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀原代鳃细胞培养方法,其特征在于,步骤(1)中所述浸泡液配制方法为:纯净水中加NaCl至盐度为5~10,并于100ml浸泡液中加入40~60μl双抗溶液(青霉素100Units/ml、链霉素100μg/ml),微孔滤膜过滤除菌。

4.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀原代鳃细胞培养方法,其特征在于,步骤(1)中所述清洗液的配方如下:并且,上述100ml清洗液中加入90~110μl(青霉素100Units/ml、链霉素100μg/ml)双抗溶液,微孔滤膜过滤除菌,即得。

5.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀原代鳃细胞培养方法,其特征在于,步骤(2)中使用胰蛋白酶消化鳃丝的方法如下:于37℃,CO2细胞培养箱中消化15~20min,其间每5min摇晃培养皿一次。

6.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀原代鳃细胞培养方法,其特征在于,步骤(2)中所述红细胞裂解液为Solarbio。

7.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀原代鳃细胞培养方法,其特征在于,步骤(3)中完全培养液成分包括:DMEM基础培养基中加入胎牛血清,DMEM基础培养基与胎牛血清体积比为3~5:1,每100ml培养液中加入90~110μl双抗溶液(青霉素100Units/ml、链霉素100μg/ml)和0.5~1.5ml L-谷氨酰胺溶液(20mmol/L),并使调pH至为7.6~7.8之间。

8.根据权利要求1所述的暗纹东方鲀原代鳃细胞培养方法,其特征在于,步骤(3)中培养的方法为:26℃细胞培养箱中培养12-24h,之后倒掉培养瓶中培养液,加入DMEM基础培养基(无血清),清洗,倒掉清洗液后加入新的完全培养液,继续扩大培养。