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专利号: 2019104584688
申请人: 新乡医学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-10-22
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种保护aFGF蛋白药物稳定性和活性的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1、aFGF蛋白的表达:将aFGF蛋白氨基酸编码序列插入含组氨酸标签的pET‑11b质粒中后,导入到大肠杆菌BL21菌株中,当细菌密度生长至600nm下吸光度为0.4‑0.8时,在18℃环境下由IPTG诱导aFGF蛋白表达12‑18h,离心收集细菌;所述aFGF蛋白氨基酸编码序列源自UniProt数据库,编号为P05230,所选序列为16F‑155D;

步骤2、aFGF蛋白的纯化:将步骤1中收集的细菌重悬在磷酸盐缓冲溶液中,并经超声裂解破碎将aFGF蛋白释放,细菌裂解液经肝素凝胶层析柱,使用洗脱液1洗脱得到aFGF蛋白粗品;aFGF蛋白粗品经镍离子凝胶层析柱分离,使用洗脱液2洗脱得到aFGF蛋白纯品液;

所述洗脱液1由三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液和NaCl配制而成,且所述三羟甲基氨基甲烷在所述洗脱液1中的质量浓度为50mmol/L,所述NaCl在所述洗脱液1中的质量浓度为

1.5mol/L,所述洗脱液1的pH为7.2;

所述洗脱液2由三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液和咪唑配制而成,且所述三羟甲基氨基甲烷在所述洗脱液2中的质量浓度为50mmol/L,所述咪唑在所述洗脱液2中的质量浓度为

0.3mol/L,所述洗脱液2的pH为7.2;

步骤3、脱盐:将步骤2中得到的aFGF蛋白纯品液装入透析袋中,再将透析袋置于磷酸盐缓冲溶液中脱盐,得到脱盐后的aFGF蛋白液;

步骤4、调整脱盐后的aFGF蛋白液的浓度,调整后的aFGF蛋白液的浓度为5‑400μg/mL;

步骤5、配制保护剂溶液;

所述保护剂溶液按体积分数计由50%甘油与50%混合溶液组成,所述混合溶液由磷酸盐缓冲液及硫酸葡聚糖组成,且所述硫酸葡聚糖在所述磷酸盐缓冲液中的浓度为经步骤4调整后的aFGF蛋白液浓度的1‑10倍;

步骤6、将经步骤4调整浓度后的aFGF蛋白液与步骤5中配制的硫酸葡聚糖溶液按体积比为1:1‑10混合,得到混合液;

步骤7、将步骤6中的混合液分装,置于‑20~‑80℃冰箱中保存。

2.根据权利要求1所述的保护aFGF蛋白药物稳定性和活性的方法,其特征在于,步骤1中所述离心转速为8000r/min。

3.根据权利要求1所述的保护aFGF蛋白药物稳定性和活性的方法,其特征在于,步骤3中aFGF蛋白纯品液与磷酸盐缓冲液的体积比为1:50‑200。

4.根据权利要求1所述的保护aFGF蛋白药物稳定性和活性的方法,其特征在于,所述磷酸盐缓冲溶液的pH为7.4。