1.一种贻贝仿生多肽复合磁珠,其特征在于,所述的贻贝仿生多肽复合磁珠的内核为磁性微球,其内核外依次包覆丙烯酰胺基硅烷化层、苯硼酸基高分子聚合物层、贻贝仿生多肽层;所述的贻贝仿生多肽层通过贻贝仿生多肽链的3,4二羟基苯丙氨酸与苯硼酸基高分子聚合物层中的苯硼酸进行动态共价反应固定到苯硼酸基高分子聚合物层表面;所述苯硼酸基高分子聚合物层利用紫外光引发聚合或氧化还原引发自由基聚合接枝到丙烯酰氨基硅烷化层表面。
2.根据权利要求1所述的贻贝仿生多肽复合磁珠,其特征在于,所述的贻贝仿多肽链具体包括链结合段(DOPA)n、链增长段(Y)m以及链识别段X。
3.根据权利要求2所述的贻贝仿生多肽复合磁珠,其特征在于,所述的链结合段(DOPA)n的3,4二羟基苯丙氨酸与苯硼酸发生动态共价反应,链长1≤n≤6;所述链增长段(Y)m中Y为色氨酸S、甘氨酸G或其组合,链长1≤m≤6;所述链识别段X,包括RGE、RGD、WxEAAYQrFL及对肿瘤细胞具有特异性识别功能的多肽序列。
4.根据权利要求1‑3任一项所述的贻贝仿生多肽复合磁珠的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制备丙烯酰胺基磁性微球:将磁性微球和3‑(三甲氧基甲硅烷基)丙基甲基丙烯酸酯溶于醇溶液中,摇床反应完成后在外加磁场作用下洗涤,得到丙烯酰胺基修饰磁性微球;
(2)制备苯硼酸基高分子聚合物修饰磁性微球:取步骤(1)中制备的丙烯酰胺基修饰磁性微球,加入功能单体和亲水单体,利用紫外光引发聚合或氧化还原引发自由基聚合接枝到丙烯酰胺基硅烷化磁性微球表面,经氮气脱氧后,室温下氧化还原反应,外加磁场作用下洗涤后得到苯硼酸基高分子聚合物修饰磁性微球;
(3)制备贻贝仿生多肽复合磁珠:取贻贝仿生多肽溶液和步骤(2)中制备的苯硼酸基高分子聚合物修饰磁性微球加入到PBS缓冲溶液中,平板摇床反应后经磁分离洗涤后制备得到贻贝仿生多肽复合磁珠。
5.根据权利要求4所述的贻贝仿生多肽复合磁珠的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述的磁性微球、3‑(三甲氧基甲硅烷基)丙基甲基丙烯酸酯和醇溶液的用量比为40mg:250
750uL:4.5mL。
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6.根据权利要求4所述的贻贝仿生多肽复合磁珠的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述的功能单体为3‑丙烯酰胺基苯硼酸或4‑(2‑丙烯酰氨基乙基氨基甲酰基)‑3‑氟苯硼酸;所述的亲水单体为HEAA、HEMA或HPMA;所述的紫外光引发聚合中光引发剂为2‑羟基‑4'‑(2‑羟基乙氧基)‑2‑甲基苯丙酮,所述的氧化还原引发自由基聚合中引发剂为过硫酸铵和N,N,N’,N’,‑四甲基乙二胺。
7.根据权利要求4所述的贻贝仿生多肽复合磁珠的制备方法,其特征在于, 步骤(2)所述的苯硼酸基高分子聚合物修饰磁性微球的制备方法为称取步骤(1)合成的丙烯酰胺基修饰磁性微球、功能单体、亲水单体和光引发剂溶解于甲醇或N,N’‑二甲基甲酰胺中,经氮气脱氧后高压汞灯150 300W紫外光引发聚合物10 30min,经外加磁场作用下甲醇、水反复清~ ~洗,室温真空干燥后获得苯硼酸基高分子聚合物修饰磁性微球;所述的丙烯酰胺基修饰磁性微球、功能单体、亲水单体和光引发剂的用量比为20mg :20 60mg:213 639mg:2.5~ ~ ~
7.5mg。
8.根据权利要求4所述的贻贝仿生多肽复合磁珠的制备方法,其特征在于, 步骤(2)所述的苯硼酸基高分子聚合物修饰磁性微球的制备方法为称取步骤(1)合成的丙烯酰胺基修饰磁性微球、功能单体、亲水单体、APS、TEMED溶解于蒸馏水中,氮气脱氧、常温摇床反应后,在外加磁场作用下用甲醇、水反复清洗,室温真空干燥获得苯硼酸基高分子聚合物修饰磁性微球;所述的丙烯酰胺基修饰磁性微球、功能单体、亲水单体、APS,TEMED、蒸馏水的用量比为20mg :20 60mg:213 639mg:0.5 2.5mg :0.5 2.5uL:3 5mL。
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9.根据权利要求4所述的贻贝仿生多肽复合磁珠的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述的贻贝仿生多肽溶液为将合成的贻贝仿生多肽FITC‑(DOPA)4‑(G) 4‑GRGES、(DOPA) 4‑(S) 4‑WxEAAYQrFL或(DOPA) 4‑(G)4‑GRGDS溶解于二甲基亚砜,所述的贻贝仿生多肽溶液的浓度为20mg/mL;所述的贻贝仿生多肽溶液和苯硼酸基高分子聚合物修饰磁性微球的质量比为1:4 20。
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10.根据权利要求1‑3任一项所述的贻贝仿生多肽复合磁珠在循环肿瘤细胞的非诊断和治疗目的的富集、分离与纯化中的应用,其特征在于,将一定量的贻贝仿生多肽复合磁珠加入到待分离的循环肿瘤细胞样本中,室温下震荡后,在外加磁场作用下获得富集的循环肿瘤细胞,加入20 120mmol/L的果糖或葡萄糖溶液震荡,将贻贝仿生多肽复合磁珠从富集~的循环肿瘤细胞表面洗脱,得分离后纯化的循环肿瘤细胞。