1.一种贻 贝蒸煮液 活性肽,其特征在 于该活性 肽的氨 基酸序列 为
Pro-Arg-Ser-Arg-Phe(SEQ No:1),分子量为m/z 661.75 Da。
2.一种权利要求1所述的贻贝蒸煮液活性肽的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
1)取适量贻贝蒸煮液加入到反渗透膜(RO膜)系统中,于压力2.0~3.0 MPa、温度20~30 ℃、流速0.5~1.0 m/s处理,得贻贝浓缩蒸煮液,贻贝浓缩蒸煮液喷雾干燥得蒸煮液固体粉末;
2)将制备的贻贝蒸煮液固体粉末按照1g:10~15 mL加入到甘氨酸–NaON缓冲液中,调pH至9.0~10.0,于45~55 ℃保温10~15 min,按照贻贝蒸煮液固体粉末质量的0.5~1.0 %加入蛋白酶,酶解3~5 h;
3)将酶解液加热到90~95℃灭酶活10~15 min,4500~6000 r/min离心25~30 min,取上清液;上清液依次经超滤和层析,得活性肽。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于所述步骤1)中的贻贝为紫贻贝、厚壳贻贝,或者翡翠贻贝。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于所述步骤1)中的反渗透膜为三醋酸纤维复合膜。
5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于所述步骤2)中的蛋白酶为碱性蛋白5
酶,酶活力≥1.9×10 U/g。
6.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于所述步骤3)的超滤和层析的具体过程为:超滤:将上清液调至pH 6.5~7.0,采用1 kDa的超滤膜进行超滤处理,收集分子量小于
1 kDa组分,即超滤酶解液;
层析:将上述超滤酶解液用超纯水配成20~25 mg/mL的溶液,经凝胶柱层析分离,用双蒸水进行洗脱,根据280 nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,其中,羟基自由基清除活性最高组分为凝胶层析酶解物,将上述凝胶层析酶解物用超纯水配成30~50 μg/mL的溶液,利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行纯化,根据羟基自由基清除活性得1个高活性抗氧化肽Pro-Arg-Ser-Arg-Phe(SEQ No:1)。
7.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于所述凝胶为葡聚糖凝胶LH-20;所述反相高效液相色谱条件为:进样量20~25 μL;色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18(250×4.6mm,5 μm);柱温为20~25 ℃;流动相:20%乙腈(含0.1%三氟乙酸);洗脱速度1.0 mL/min;紫外检测波长280 nm。
8.一种 权利 要 求1所述 的贻 贝蒸 煮 液活 性肽 的应 用,其 特征 在于Pro-Arg-Ser-Arg-Phe(SEQ No:1)对羟基自由基和超氧阴离子自由基具有良好的清除作用;Pro-Arg-Ser-Arg-Phe(SEQ No:1)具有抗氧化活性强和安全无毒副作用的优点,可用作抗氧化相关的保健食品和药品。