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专利号: 2018114451461
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-11-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种降低黄酒酵母尿素积累的方法,其特征在于,通过在黄酒酵母培养过程添加雷帕霉素,调控Gzf3定位于细胞质,降低黄酒酵母发酵过程中尿素的积累。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述黄酒酵母的基因组上融合表达GZF3、FKBP12,并在质粒上融合表达RPL13A、FRB;所述方法通过培养环境中的雷帕霉素,使FKBP12和FRB结合,并使Gzf3在细胞质定位蛋白Rpl13A的作用下,定位在细胞质,激活尿素利用相关基因的转录。

3.一种构建尿素积累能力降低的黄酒酵母的方法,其特征在于,在黄酒酵母基因组上融合表达GZF3、FKBP12,并在质粒上融合表达RPL13A、FRB。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,主要包括如下步骤:

(1)构建GZF3、FKBP12重组框;

(2)将GZF3、FKBP12重组框整合到重组黄酒酵母JNZ01(MATa,Δura3,Δtrp1,TOR1S1972R,Δfpr1)基因组上GZF3基因之后,得到重组黄酒酵母JNZ6(MATa,Δura3,Δtrp1,TOR1S1972R,Δfpr1,GZF3::FKBP12);

(3)在含有5-FOA和5-FAA的培养基上筛选能够正常生长的菌株;

(4)构建RPL13A、FRB融合表达框,将RPL13A、FRB融合表达框插入高拷贝游离表达质粒pRS426-TEF-URA3中,得到重组质粒pRS426-TEF-Rpl13A-FRB-URA3,转化重组黄酒酵母JNZ6得到JNZ7(MATa,Δura3,Δtrp1,TOR1S1972R,Δfpr1,GZF3::FKBP12,pRS426-TEF-Rpl13A-FRB-URA3);

(5)将菌株JNZ7在添加雷帕霉素的体系下,诱导Gzf3定位于细胞质,获得尿素积累能力降低的黄酒酵母。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述重组黄酒酵母JNZ01的构建方法为:以黄酒酵母XZ-11为出发菌株,敲除其FPR1基因,并突变TOR1基因编码的蛋白第1972位丝氨酸残基为精氨酸。

6.应用权利要求3~5任一所述方法构建的尿素积累能力降低的黄酒酵母。

7.权利要求6所述的黄酒酵母在食品领域的应用。

8.权利要求6所述的黄酒酵母在制备黄酒方面的应用。

9.一种应用权利要求6所述黄酒酵母的发酵方法,其特征在于,将所述黄酒酵母接种至发酵培养基,于28~30℃发酵。

10.一种降低黄酒中尿素或EC含量的方法,其特征在于,以权利要求6所述的黄酒酵母作为发酵菌株进行发酵。