1.一种降低黄酒酵母尿素积累的方法,其特征在于,通过在黄酒酵母培养过程添加雷帕霉素,调控Dal80定位于细胞质,降低黄酒酵母发酵过程中尿素的积累。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述黄酒酵母的基因组上融合表达DAL80、FKBP12,并在质粒上融合表达RPS1B、FBR亚基;所述方法通过培养环境中的雷帕霉素,使Dal80在Rps1B蛋白的作用下定位于细胞质中,降低黄酒发酵过程中尿素的积累。
3.一种构建尿素积累能力降低的黄酒酵母的方法,其特征在于,在黄酒酵母基因组上融合表达DAL80、FKBP12,并在质粒上融合表达RPS1B、FRB。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,主要包括如下步骤:
(1)构建DAL80、FKBP12重组框;
(2)通过CRISPR-Cas9系统将DAL80、FKBP12重组框整合到重组黄酒酵母JNZ01(MATa,Δura3,Δtrp1,TOR1 S1972R,Δfpr1)基因组DAL80基因之后,得到重组黄酒酵母JNZ8(MATa,Δura3,Δtrp1,TOR1 S1972R,Δfpr1,DAL80::FKBP12);
(3)消除CRISPR-Cas9系统质粒;
(4)构建RPS1B、FRB融合表达框;
(5)将RPS1B、FRB融合表达框插入游离高拷贝表达质粒pRS426-TEF-URA3中,得到重组质粒pRS426-TEF-Rps1B-FRB-URA3,转化重组黄酒酵母JNZ8得到JNZ9(MATa,Δura3,Δtrp1,TOR1 S1972R,Δfpr1,DAL80::FKBP12,pRS426-TEF-Rps1B-FRB-URA3);
(6)在重组黄酒酵母的培养过程中,向培养基中添加雷帕霉素,诱导Dal80定位于细胞质。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述重组黄酒酵母JNZ01的构建方法为:以黄酒酵母XZ-11为出发菌株,敲除其FPR1基因,并突变TOR1基因编码的蛋白第1972位丝氨酸残基为精氨酸。
6.应用权利要求3~5任一所述方法构建的尿素积累能力降低的黄酒酵母。
7.权利要求6所述的黄酒酵母在食品领域的应用。
8.权利要求6所述的黄酒酵母在黄酒生产领域的应用。
9.一种应用权利要求6所述黄酒酵母的发酵方法,其特征在于,将所述黄酒酵母接种于发酵培养基,于28~30℃发酵。
10.一种降低黄酒中尿素或EC含量的方法,其特征在于,以权利要求6所述的黄酒酵母作为发酵菌株进行发酵。