利索能及
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专利号: 2018114451495
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-11-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种构建尿素积累能力降低的黄酒酵母的方法,其特征在于,以黄酒酵母XZ‑11为出发菌株,进行了MATa,Δura3,Δtrp1,TOR1 S1972R,Δfpr1的改进,构建重组黄酒酵母 JNZ01;在所述黄酒酵母JNZ01的基因组上融合表达GLN3、FKBP12或是GAT1、FKBP12,并在质粒上融合表达SPT15、FRB;通过CRISPR‑Cas9系统同时对FPR1基因进行敲除,并对TOR1基因进行点突变;所述CRISPR‑Cas9系统包括但不限于p414‑TEF1p‑Cas9‑CYC1t、pRS426‑Tor1sgRNA‑Fpr1sgRNA‑URA3。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,具体步骤如下:(1)以pRS426‑URA3为出发质粒,引入sgRNA表达元件,将其分别定位在FPR1位点的20nt序列和TOR1位点的20nt序列,获得质粒pRS426‑Tor1sgRNA‑Fpr1sgRNA‑URA3;(2)分别构建用于敲除FPR1基因的敲除框和用于突变TOR1基因的重组框;将质粒p414‑TEF1p‑Cas9‑CYC1t转入黄酒酵母XZ‑11;(3)将质粒pRS426‑Tor1sgRNA‑Fpr1sgRNA‑URA3、FPR1基因敲除框和TOR1基因突变重组框一起转入带有p414‑TEF1p‑Cas9‑CYC1t的出发菌株中;筛选阳性转化子。