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专利号: 2018114438151
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-11-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种降低黄酒酵母尿素积累的方法,其特征在于,以黄酒酵母XZ‑11为出发菌株,进行了MATa,Δura3,Δtrp1,TOR1 S1972R,Δfpr1的改进,构建重组黄酒酵母JNZ01,通过在含雷帕霉素的体系中培养黄酒酵母JNZ01,将转录激活因子Gln3或Gat1定位于细胞核,调控氮代谢阻遏效应转录激活因子不受氮源条件影响,降低黄酒酵母发酵过程中尿素的积累;

所述黄酒酵母JNZ01的基因组上分别融合表达GLN3、FKBP12或GAT1、FKBP12,并在质粒上融合表达SPT15、FRB;通过在含雷帕霉素的体系中培养该菌株,使FKBP12和FRB结合,使Gln3或Gat1在细胞核定位蛋白Spt15的作用下转移到细胞核。

2.一种构建尿素积累能力降低的黄酒酵母的方法,其特征在于,所述方法是以黄酒酵母XZ‑11为出发菌株,进行了MATa,Δura3,Δtrp1,TOR1 S1972R,Δfpr1的改进,构建重组黄酒酵母JNZ01,在重组黄酒酵母JNZ01的基因组上融合表达GLN3、FKBP12,并在质粒上融合表达SPT15、FRB;通过在含雷帕霉素的体系中培养该菌株,使FKBP12和FRB结合,使Gln3在细胞核定位蛋白Spt15的作用下转移到细胞核;

或,在重组黄酒酵母JNZ01的基因组上融合表达GAT1、FKBP12,并在质粒上融合表达SPT15、FRB;通过在含雷帕霉素的体系中培养该菌株,使FKBP12和FRB结合,使Gat1在细胞核定位蛋白Spt15的作用下转移到细胞核。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:(1)构建GLN3、FKBP12重组框和GAT1、FKBP12重组框;

(2)将GLN3、FKBP12重组框和GAT1、FKBP12重组框分别整合到重组黄酒酵母JNZ01基因组上GLN3和GAT1基因之后;

(3)消除CRISPR‑Cas9系统质粒,分别得到重组黄酒酵母JNZ02和JNZ03;

(4)构建SPT15、FRB融合表达框;

(5)将SPT15、FRB融合表达框转化至重组黄酒酵母JNZ02和JNZ03中,得到重组黄酒酵母JNZ04和JNZ05;

(6)在重组黄酒酵母JNZ04和JNZ05的培养过程中,向培养基中添加雷帕霉素,诱导Gln3和Gat1定位于细胞核;

所述重组黄酒酵母JNZ01的构建方法为:以黄酒酵母XZ‑11为出发菌株,敲除其FPR1基因,并突变TOR1基因编码的蛋白第1972位丝氨酸残基为精氨酸。

4.应用权利要求2或3所述方法构建的尿素积累能力降低的黄酒酵母,所述黄酒酵母在含雷帕霉素的培养基中能够促使FKBP12与FRB结合,使转录激活因子Gln3或Gat1在细胞核定位蛋白Spt15的作用下定位于细胞核。

5.权利要求4所述的黄酒酵母在食品领域的应用。

6.权利要求4所述的黄酒酵母在制备黄酒方面的应用。

7.一种应用权利要求4所述黄酒酵母的发酵方法,其特征在于,将所述黄酒酵母接种至含有雷帕霉素的发酵培养基中,于28~30℃发酵。

8.一种降低黄酒中尿素或EC含量的方法,其特征在于,以权利要求4所述的黄酒酵母作为发酵菌株进行发酵。