1.一种大黄鱼肉肉抗氧化肽,其特征在于该抗氧化肽的氨基酸序列为
Tyr-Leu-Met-Ser-Arg,ESI-MS检测分子量为651.77 Da。
2.一种大黄鱼鱼肉抗氧化肽制备方法,其特征在于包括以下步骤:
1)将大黄鱼鱼肉绞碎,按照料液比1 g:8~12 mL加入蒸馏水,调pH值至6. 5~7.5,于
45~55℃保温10~15 min;
2)按照大黄鱼鱼肉质量的0.8~1.2%加入木瓜蛋白酶,于45~55℃酶解3~5 h;将上述酶解液调pH值至9.0~10.0,按照大黄鱼鱼肉质量的1.5~2.0%加入碱性蛋白酶,于45~55℃酶解3~5 h;
3)将酶解液加热到90~95℃灭活10~15 min,5000~6000 r/min离心15~25 min,取上清液;上清液依次经超滤和层析,得到抗氧化肽。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于所述步骤3)的超滤和层析的具体过程为:
超滤:将上清液调至pH 6.5~7.5,采用分子量3 kDa的超滤膜进行超滤处理,根据羟基自由基清除活性,收集分子量小于3 kDa部分,得超滤酶解物;
层析:将上述超滤酶解物用双蒸水配成20~30 mg/mL的溶液,经过阴离子交换树脂分离,用双蒸水、0.45~0.55 mol/L和0.90~1.10 mol/L NaCl溶液进行洗脱,根据280 nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,其中,羟基自由基清除活性最高组分为离子交换层析酶解物;将上述离子交换层析酶解物用双蒸水配成10~20 mg/mL的溶液,经过凝胶柱层析分离,用双蒸水进行洗脱,根据280 nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,其中,羟基自由基清除活性最高组分为凝胶层析酶解物,将上述凝胶层析酶解物用羟基配成45~55 μg/mL的溶液,利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行纯化,根据抗氧化活性得1个高活性抗氧化肽Tyr-Leu-Met-Ser-Arg。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于所述阴离子交换树脂为DEAE-52 纤维素,所述凝胶为葡聚糖凝胶G-15;所述RP-HPLC条件为:进样量15~20 μL;色谱柱为Zorbax SB C-18 column;柱温为30℃;流动相:A水(含0.1%三氟乙酸)和B乙腈;梯度洗脱:0~100 min乙腈浓度从0匀速升至100%;洗脱速度1.0 mL/min;紫外检测波长280 nm。
5.一种大黄鱼鱼肉抗氧化肽的用途,其特征在于:Tyr-Leu-Met-Ser-Arg用于药品、保健食品或食品添加剂对DPPH 自由基、羟基自由基、ABTS自由基和超氧阴离子自由基的清除;或者,Tyr-Leu-Met-Ser-Arg用于药品、保健食品或食品添加剂起到脂质过氧化抑制作用的用途。