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专利号: 2024104722301
申请人: 江苏海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种检测卡那霉素含量的荧光适配体传感器,其特征在于:所述荧光适配体传感器包括用两条卡那霉素分裂适配体作为识别探针,核酸外切酶ⅠExoⅠ作为淬灭剂,通过合成信号探针DNA银纳米簇DNA‑AgNCs后检测不同靶标浓度的荧光信号变化,构建卡那霉素荧光适配体传感器所用序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的一种检测卡那霉素含量的荧光适配体传感器,其特征在于:卡那霉素分裂适配体序列SEQ ID NO.1具体为:Split‑Apt‑Ⅰ:5’‑TGGGGGTTGAG‑3’;Split‑Apt‑Ⅱ:5’‑GCTAAGCCGA‑3’。

3.根据权利要求1所述的一种检测卡那霉素含量的荧光适配体传感器,其特征在于:所述ExoⅠ的酶切温度为37℃,酶切时间为35min,所述DNA‑AgNCs的用量为1.4μmol/L。

4.根据权利要求1所述的一种检测卡那霉素含量的荧光适配体传感器,其特征在于:反应体系缓冲液的PH为6.75。

5.一种制备权利要求1‑4任一项所述一种检测卡那霉素含量的荧光适配体传感器的方法,其特征在于:包括以下步骤:S1:Split‑Apt‑Ⅰ序列与cDNA‑AgNCs序列的杂交互补:cDNA‑AgNCs序列与Split‑Apt‑Ⅰ序列混合反应,溶于适量缓冲液中,以形成dsDNA结构;

S2:Split‑Apt‑Ⅰ、Split‑Apt‑Ⅱ与卡那霉素的识别反应:取Split‑Apt‑Ⅱ溶于适量缓冲液中,于金属浴中加热,然后转移至上述dsDNA溶液中,同时加入稀释过的卡那霉素溶液共同孵育;

S3:ExoⅠ的酶切反应:将适量ExoⅠ加入至前述溶液中进行酶切,反应结束后高温灭酶,再冰浴降温;

S4:DNA‑AgNCs信号探针的制备:向前述溶液中加入定量的硝酸银AgNO3溶液,振荡混匀后,加入等量硼氢化钠NaBH4溶液触发化学还原反应,振荡摇匀后避光反应即可制得DNA‑AgNCs信号探针。

6.根据权利要求5所述的一种检测卡那霉素含量的荧光适配体传感器的制备方法,其特征在于:S2中Split‑Apt‑Ⅰ、Split‑Apt‑Ⅱ与cDNA‑AgNCs序列的初始浓度为100μmol/L,加入卡那霉素混合孵育的时间为40min。

7.根据权利要求5所述的一种检测卡那霉素含量的荧光适配体传感器的制备方法,其特征在于:S3中ExoⅠ酶切反应温度为37℃,ExoⅠ酶切反应时间为35min,80℃范围内加热

5min以灭活酶。

8.根据权利要求5所述的一种检测卡那霉素含量的荧光适配体传感器的制备方法,其特征在于:S4中所用缓冲液的PH为6.75,DNA底物与AgNO3、NaBH4的浓度比例为:1:6:6。

9.根据权利要求5所述的一种检测卡那霉素含量的荧光适配体传感器的制备方法,其特征在于:卡那霉素的浓度为0nmol/L~10μmol/L。

10.根据权利要求5所述的一种检测卡那霉素含量的荧光适配体传感器的制备方法,其特征在于:S1中Split‑Apt‑Ⅰ与Split‑Apt‑Ⅱ混匀后于95℃变性5min,再降温缓慢复性。