1.一种检测卡那霉素的电化学生物传感器,其特征在于,包括:适配体Aptamer、引物Primer、发卡引物HAP1、发卡引物HAP2、发卡引物HAP3、血红素、PBS缓冲液、过氧化氢H2O2、Nt.BbvCI内切酶、外切酶III、修饰捕获探针CP的金电极;
所述的PBS缓冲液含有K+;
适配体Aptamer的序列如SEQ No.1所示;
引物Primer的序列如SEQ No.2所示;
发卡引物HAP1的序列如SEQ No.3所示;
发卡引物HAP2的序列如SEQ No.4所示;
发卡引物HAP3的序列如SEQ No.5所示;
捕获探针CP的序列如SEQ No.6;
捕获探针CP序列的5’端修饰-SH;
所述的电化学生物传感器的制备方法,包括以下步骤:
(1)将适配体Aptamer与引物Primer在PBS缓冲液中杂交成探针Probe;
(2)将探针Probe、发卡引物HAP1、发卡引物HAP2、发卡引物HAP3、Nt.BbvCI内切酶、外切酶III、10×Nt.BbvCI内切酶和外切酶III缓冲液、卡那霉素溶液混合后恒温孵育;
(3)将步骤(2)中的混合溶液滴加到修饰捕获探针CP的金电极上,然后恒温孵育;
(4)将血红素溶液滴加到步骤(3)所得的金电极中,然后恒温孵育;
(5)用PBS缓冲溶液漂洗步骤(4)中处理后的电极;
(6)向PBS缓冲液中加入H2O2,混合均匀,以Ag/AgCl为参比电极,以Pt电极为对电极,采用差分脉冲伏安法测量电信号变化;
(7)根据卡那霉素标准溶液的电信号作标准曲线,计算回归方程,根据回归方程与待测液电信号计算待测液中卡那霉素的浓度。
2.根据权利要求1所述的电化学生物传感器,其特征在于,所述的修饰捕获探针CP的金电极,采用以下方法制备获得:a)将金电极依次在0.3 µm和0.05 µm的氧化铝浆中进行抛光至镜面,用超纯水反复冲洗;
b)将捕获探针CP溶液滴在上述处理后的金电极表面,保温孵育。
3.根据权利要求1所述的电化学生物传感器,其特征在于,所述发卡引物HAP1浓度为1-
20 μM;所述发卡引物HAP2浓度为1-20 μM;所述发卡引物HAP3浓度为1-20 μM;所述捕获探针CP的浓度为1-20 μM。
4.根据权利要求1所述的电化学生物传感器,其特征在于,所述适配体Aptamer的终浓度为1µM;所述引物Primer的终浓度为1µM;所述血红素的终浓度为10µM;所述H2O2的终浓度为10μM;所述Nt.BbvCI内切酶和外切酶III的浓度为500U/mL。
5.根据权利要求1所述的电化学生物传感器,其特征在于,步骤(1)具体工艺为:将14 μL 灭菌水,2 μL 5×PBS,2 μL 10 μM 适配体Aptamer链和2 μL 10 μM 引物Primer链混匀,在95℃下孵育5min,缓慢冷却至室温,储存于-20 ℃下备用。
6.根据权利要求1所述的电化学生物传感器,其特征在于,步骤(2)中恒温孵育温度为
37℃。
7.根据权利要求1所述的电化学生物传感器,其特征在于,步骤(6)中测量电信号变化的参数为:电位0到-0.6 V,脉冲宽度0.05 V,扫描速率0.06 V/s。
8.权利要求1所述的电化学生物传感器用于在食品安全分析和环境监测方面来检测卡那霉素。