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专利号: 2023113499411
申请人: 南通大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-07-12
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于检测黄曲霉毒素的比色传感器,其特征在于,由捕获探针和信号探针组成;

所述捕获探针选自SSM‑COF材料修饰的带有羧基的核酸适配体,即COOH‑aptamer‑ SSM‑COF;

所述信号探针选自Au@Ir纳米材料修饰的带有巯基的核酸适配体,即SH‑aptamer‑Au@Ir;

所述SH‑aptamer选自如下序列:

5’‑SH‑ATTCGCGACGACCAAATTGAGAGGCACAATCAACTGCGGGGCGTCG‑3’;

所述COOH‑aptamer选自如下序列:

5’‑COOH‑GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCC‑3’;

步骤1中,SSM‑COF材料的制备方法如下:

载有COF的不锈钢网SSM‑COF的合成是根据原位合成法,将不锈钢网切成合适的大小,浸泡在1:4的稀盐酸溶液中12h后,用蒸馏水超声10分钟,除去表面不溶的杂质,烘干;随后,加入0.0135 g和 0.02 mmol的Tph 、 0.0138 g和 0.04 mmol的BT、n‑BuOH 0.5 mL、o‑DCB 

0.5 mL和6 M HAc溶液0.1 mL,然后进行超声处理15分钟,直到得到均匀的分散体;将上述溶液与干净的不锈钢网混合,并转移到聚四氟乙烯内衬的高压釜中,在150℃下进行72 h的溶剂热处理;最后,收集产物并用四氢呋喃和丙酮洗涤数次,并在60℃下真空干燥10 h;

步骤2中,Au@Ir纳米材料的制备方法如下:

将50mL 水加入到圆底烧瓶中,并在50mg AA抗坏血酸和10 mg Na3IrCl6 • xH2O加热至‑1

95℃;随后,加入1mL 新鲜制备的25mg mL 的 NaBH4溶液滴入混合溶液中,大力搅拌15分钟冷却至室温,得到冷凝和纯化的 Ir 纳米粒子,离心过滤,供进一步使用;

将得到的Ir Nps加入 10 mL的0.037%的HAuCl4水溶液和10 mL含0.06% 的AA 和0.03%的柠檬酸钠的水溶液,两种溶液完全注入后,将混合物在油浴中加热至沸腾磁力搅拌30分钟;最后,得到的Au@Ir作为产物冷却至室温,并在室温下黑暗保存以备使用。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测黄曲霉毒素的比色传感器的制备方法,其特征在于,包括以步骤:步骤1、COOH‑aptamer‑SSM‑COF的制备:

将干燥后的载有COF的不锈钢网SSM‑COF放入40 ul 的适配体5μM中,然后加入少量NHS和EDC活化羧基,室温振荡孵育12 h,得到COOH‑aptamer‑ SSM‑COF;

步骤2、SH‑Aptamer‑Au@Ir的制备:

首先,采用TCEP激活巯基适配体;然后取制备好的Au@Ir纳米材料溶液20ul,将10 μL适配体5μM加入到Au@Ir纳米材料溶液中,在37℃下振荡12 h,形成信号探针Apt‑ Au@Ir供进一步使用。

3.根据权利要求2所述的一种用于检测黄曲霉毒素的比色传感器的制备方法,其特征在于,步骤1中,SSM‑COF材料与COOH‑aptamer激活体系的用量,以每1‑3片直径为5mm的SSM‑COF材料对应采用10μL 的COOH‑aptamer激活体系;其中,水的用量,以每一片直径为5mm 的SSM‑COF材料对应采用80‑100μL水。

4.根据权利要求2所述的一种用于检测黄曲霉毒素的比色传感器的制备方法,其特征在于,步骤2中,SH‑aptamer激活体系与Au@Ir溶液的用量以体积比为1:1‑3:1。

5.根据权利要求2‑4任一项所述的制备方法得到的比色传感器在检测黄曲霉毒素中的应用,其特征在于,将比色传感器制备成检测试剂或试剂盒,以实现待测样品中黄曲霉毒素的定性和定量检测。

6.一种采用权利要求1所述的比色传感器检测黄曲霉毒素的方法,其特征在于,包括以下步骤:将捕获探针放入待测溶液中,恒温孵育;待孵育结束后,取出SSM加入信号探针,置于常温下反应,待反应结束后,取出金属网,加入TMB‑H2O2溶液,室温孵育;若溶液由无色变为蓝色,则表明待测样品溶液中存在黄曲霉毒素;测定反应溶液的吸光度,对照标准曲线可获得黄曲霉毒素浓度。