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专利号: 2021108193426
申请人: 江苏大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-09-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.基于电化学生物传感器用于检测黄曲霉毒素B1的用途,其特征在于,步骤如下:

(1)首先制备得到AuNPs溶液;然后将sDNA溶液和TCEP溶液混合,得到混合溶液A;再将相同浓度的Fc‑Apt溶液和Fc‑aDNA溶液混合均匀,得到混合溶液B;

(2)取步骤(1)制备的AuNPs溶液滴加到玻碳电极表面,进行第一次孵育,然后取步骤(1)制备的混合溶液A继续滴加到玻碳电极表面,固定反应一段时间;通过Au‑S键结合作用力,将sDNA链固定在玻碳电极表面;再将巯基己醇滴加到玻碳电极表面,进行第二次孵育;

最后将混合溶液B修饰在玻碳电极表面,进行第三次孵育,得到自参比比率电化学生物传感器;

(3)取多个所述电化学生物传感器,在其表面分别修饰不同浓度V1体积的AFB1溶液,一个浓度的AFB1溶液对应修饰一个电化学生物传感器,浓度和电化学生物传感器呈一一对应关系;经常温孵育一段时间,得到已完成识别检测的电化学生物传感器界面;

(4)用GCE工作电极、Pt对电极和Ag/AgCl参比电极三电极体系,在CHI660E电化学工作站上选择交流伏安法检测步骤(3)中修饰AFB1的电化学生物传感器界面电流;由于传感器表面的Fc‑Apt与目标物结合并被带离电极表面,交流伏安法测量电极表面剩余的Fc‑Apt产生的Fc氧化还原电流,记为IFc‑Apt;Fc‑aDNA不与目标物结合,检测不发生变化的Fc‑aDNA产生的Fc氧化还原电流,记为IFc‑aDNA;以IFc‑Apt和IFc‑aDNA作比率,IFc‑Apt/IFc‑aDNA比率信号值与AFB1溶液的浓度呈负相关,每一个浓度的AFB1会对应一个比率信号值,根据比率信号值和AFB1浓度的对数值构建得到标准曲线;

(5)样品中AFB1的检测:将样品处理后得到样品液,修饰V2体积的样品液于电化学生物传感器表面,常温孵育后按照步骤(4)进行操作测定电流值,分析数据得IFc‑Apt/IFc‑aDNA比率信号值;将IFc‑Apt/IFc‑aDNA比率信号值代入步骤(4)构建的标准曲线,即可获知样品中AFB1的浓度;实现未知样品中黄曲霉毒素B1检测的用途。

2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(1)中,所述AuNPs溶液的浓度为5nM;

所述sDNA溶液和TCEP溶液的浓度分别为0.5μM和1mM;所述Fc‑Apt和Fc‑aDNA的浓度均为0.5μM。

3.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(1)中,所述sDNA溶液和TCEP溶液混合时的体积比为1:1;所述Fc‑Apt溶液和Fc‑aDNA溶液混合时的体积比为1:1。

4.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(2)中,所述AuNPs溶液、混合溶液A、混合溶液B滴加到GCE电极表面的用量均为8μL。

5.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(2)中,所述固定反应一段时间为14h;

所述巯基己醇的浓度为1mM,滴加到GCE电极表面的用量为8μL。

6.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(2)中,所述第一次孵育的温度为37℃,孵育时间为30‑80min;所述第二次孵育为常温孵育,孵育时间为30‑80min;所述第三次孵育为常温孵育,孵育时间为60min。

7.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(3)中,所述AFB1溶液的浓度为0.1pg ‑1 ‑1mL ‑10ng mL ;所述常温孵育一段时间为30‑80min。

8.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(5)中,所述常温孵育一段时间为30‑

80min。

9.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(3)‑(5)中所述V1、V2的用量均为8μL。