1.一种黄曲霉毒素磁性多重增敏传感器,其特征在于:由组氨酸修饰Fe3O4形成的纳米酶His‑Fe3O4;再将纳米酶His‑Fe3O4偶连可以特异性识别AFB1的单克隆抗体形成的捕获探针His‑Fe3O4@Ab,纳米酶偶连AFB1的抗原形成的检测探针His‑Fe3O4@Ag;捕获探针His‑Fe3O4@Ab和检测探针His‑Fe3O4@Ag通过抗原抗体之间的特异性结合形成二维网状结构,即黄曲霉毒素磁性多重增敏传感器。
2.基于权利要求1所述的一种黄曲霉毒素磁性多重增敏传感器的制备,其特征在于,包括以下步骤:
(1)His‑Fe3O4纳米酶的制备
首先将FeCl3·6H2O溶解在乙二醇溶液中,搅拌至溶液透明,加入CH3COONa和组氨酸,
800~1200rpm转速下搅拌,30min后将混合物进行超声10min,后转移到聚四氟乙烯内衬不锈钢高压釜中200~240℃下反应12~16h,反应完成后,高压釜冷却至室温,再用乙醇清洗数次并在60℃下干燥得尺寸在400~500nm的纳米粒子His‑Fe3O4,即His‑Fe3O4纳米酶;
(2)捕获探针His‑Fe3O4@Ab的制备抗体与His‑Fe3O4纳米酶表面的组氨酸通过活化酯法偶连,将所使用单克隆抗体溶于磷酸盐缓冲溶液中,加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)与N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)进行活化反应,然后超滤去除未反应物质,加入超声分散的His‑Fe3O4纳米酶,透析纯化溶解于0.01M磷酸盐缓冲溶液中,获得的捕获探针His‑Fe3O4@Ab,并保存在4℃冰箱中备用;
(3)检测探针His‑Fe3O4@Ag的制备抗原与His‑Fe3O4纳米酶表面的组氨酸通过活化酯法偶连,将所使用AFB1抗原溶于磷酸盐缓冲溶液中,加入EDC与NHS在4℃反应30min进行活化反应,超滤去除未反应物质,加入超声分散的His‑Fe3O4纳米酶,透析纯化溶解于0.01M磷酸盐缓冲溶液中,获得的检测探针His‑Fe3O4@Ag,并保存在4℃冰箱中备用;
(4)二维网状结构的形成
将捕获探针His‑Fe3O4@Ab加入含有目标物的溶液中反应10~20min后,进行磁分离,再加入检测探针His‑Fe3O4@Ag反应10~20min,再次磁分离即可获得与目标物浓度相反程度的二维网状结构。
3.根据权利要求2所述的一种黄曲霉毒素磁性多重增敏传感器的制备,其特征在于,步骤1中FeCl3·6H2O、CH3COONa和组氨酸的物质的量分别为1mmol、18~26mmol和4~8mmol,反应体系为40mL乙二醇溶液。
4.根据权利要求2所述的一种黄曲霉毒素磁性多重增敏传感器的制备,其特征在于,步骤2中所使用单克隆抗体、NHS和EDC物质的量比例为1:38~42:38~42,分别为28.3μmol、
1.075~1.188mmol和1.075~1.188mmol,室温孵育,反应时间为30min,超滤后抗体活化液中所加入His‑Fe3O4纳米酶与单克隆抗体物质的量比例为1:8~12,分别为2.83μmol与22.64~33.96μmol,偶联温度为4℃,反应时间为6~8h。
5.根据权利要求2所述的一种黄曲霉毒素磁性多重增敏传感器的制备,其特征在于,步骤3中所使用AFB1抗原、NHS和EDC物质的量比例为1:18~22:18~22,分别为28.3μmol、
509.6~622.6μmol和509.6~622.6μmol,室温孵育,反应时间为30min,超滤后抗体活化液中所加入His‑Fe3O4纳米酶与单克隆抗体物质的量比例为1:8~12,分别为2.83μmol与22.64~33.96μmol,偶联温度为4℃,反应时间为6~8h。
6.根据权利要求2所述的一种黄曲霉毒素磁性多重增敏传感器的制备,其特征在于,步骤4中所使用的捕获探针His‑Fe3O4@Ab与检测探针His‑Fe3O4@Ag的体积比为1:1~1.5mL,含有目标物的溶液体积为1.5mL,反应温度为25℃。
7.基于权利要求1或2所述的一种黄曲霉毒素磁性多重增敏传感器的检测方法,其特征在于,在不同浓度的AFB1标准液中加入0.2~0.4mL捕获探针His‑Fe3O4@Ab,震荡孵育,磁分离所构建复合物,再加入0.2~0.6mL检测探针His‑Fe3O4@Ag,震荡孵育,磁分离所构建空间结构,加入显色试剂0.4mL,反应3~8min后磁分离空间结构,测定上清液650nm处吸光值,建立吸光值与AFB1的标准曲线。
8.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,加入捕获探针His‑Fe3O4@Ab后,25℃下震荡孵育10~20min;加入检测探针His‑Fe3O4@Ag后,25℃下震荡孵育10~20min。
9.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,所述显色液体系为0.05M柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液,其中,包含5μL的0.1M TMB溶液与10μL的5.0M H2O2溶液。