1.一种用于检测黄曲霉毒素B1的比色传感器,其特征在于,由捕获探针和信号探针组成;
所述捕获探针由离子液体IL改性过的二氧化硅气凝胶与金属网SSM组合而成并修饰带有羧基的核酸适配体Aptamer 1,即IL@SiO2/SSM‑Apt 1;其中,IL@SiO2/SSM‑Apt 1的制备如下:IL@SiO2/SSM材料的制备:将直径为0.5 cm的不锈钢网SSM分散到0.1 M HCl中活化表面
12 h;然后,将TEOS、乙醇和水按4:4:1的摩尔比混合均匀,将蚀刻好的SSM放入上述TEOS、乙醇和水的混合物中,同时加入适量HCl调节pH至2 3,并进行一段时间的搅拌,随后加热水解~
1h;水浴结束后,继续磁力搅拌一段时间后,加入一定浓度的氨水溶液,调节溶液pH值,以便进行缩聚反应,静置硅溶胶,等待凝胶形成;待凝胶形成后,向盛有凝胶的烧杯中加入适量乙醇,密封,置于一定温度的水浴锅中水浴老化8 12h;之后用正己烷交换凝胶孔隙中的乙~醇,交换2次,每次6‑8小时,且均是在45℃水浴环境中完成;待交换步骤完成后,使用3‑氨丙基三甲氧基硅烷APTMS与离子液体IL1‑烯丙基‑3‑丁基咪唑溴盐对气凝胶进行改性;凝胶的改性过程也是在水浴环境中进行,首先将气凝胶浸泡在APTMS 与IL中24小时,随后移入自由基引发剂偶氮二异丁腈AIBN中,浸泡2h后在70℃下引发聚合反应,凝胶转变为白色不透明状态;将聚合物改性后的凝胶用正己烷n‑Hexane浸泡洗涤3次,每次8h,以除去残留试剂并交换凝胶孔隙中的乙醇;将凝胶于室温下干燥24 h,后转入真空干燥箱中50℃干燥24h,得到IL改性SiO2气凝胶;
IL@SiO2/SSM‑Apt 1的制备:首先,采用等体积的2 mM的EDC、NHS激活Aptamer 1上5’端的‑COOH,获得COOH‑Aptamer 1激活体系;然后,将带有‑NH2的IL@SiO2/SSM材料与COOH‑Aptamer 1激活体系混合,加水,在37℃下孵育;待孵育结束后,洗涤除去未结合的单链COOH‑Aptamer 1,加入1%牛血清蛋白封闭未结合位点,形成IL@SiO2/SSM‑Apt 1;
所述信号探针为MoS2/Au纳米材料修饰的带有巯基的核酸适配体Aptamer 2,即MoS2/Au‑Apt 2;其中,MoS2/Au‑Apt 2的制备如下:MoS2/Au纳米材料的制备:将30 mg (NH4)2MoS4和2.0 mL 的1%HAuCl4·4H2O通过超声分散到18 mL水中30 min;之后,在搅拌下连续向混合物中添加0.1 mL水合肼;将混合物进一步超声处理1小时,然后转移到50 mL聚四氟乙烯内衬不锈钢高压反应釜中;随后,将混合物加热至200℃ 12小时,然后冷却至室温;使用水和乙醇通过多次冲洗‑离心循环后收集产品,以去除杂质;最后,将产品重新分散在3mL水中,冷冻干燥过夜;
MoS2/Au‑Apt 2的制备:首先,采用TCEP激活SH‑Aptamer 2,获得SH‑Aptamer 2激活体系;然后,将SH‑Aptamer 2激活体系加入到MoS2/Au溶液中,在37℃下孵育;待孵育结束,将溶液磁分离,弃掉上清液,加水离心,除去未结合的单链SH‑Aptamer 2,加入1%牛血清蛋白封闭未结合位点,然后将沉淀冲洗分离,得到MoS2/Au‑Apt 2;
所述Aptamer 1选自如下序列:
5’‑COOH‑GTT GGG CAC GTG TTG TCT CTC TGT GTC TCG TGC CCT TCG CTA GGC CC‑
3’;
所述Aptamer 2选自如下序列:
5’‑SH‑ATT CGC GAC GAC CAA ATT GAG AGG CAC AAT CAA CTG CGG GGC GTC G‑3’。
2.根据权利要求1所述的一种用于检测黄曲霉毒素B1的比色传感器,其特征在于,IL@SiO2/SSM材料与COOH‑Aptamer 1激活体系的用量,以每1~3片直径5mm的IL@SiO2/SSM材料对应采用10μL COOH‑Aptamer1激活体系;水的用量,每一片直径5mm的IL@SiO2/SSM材料对应采用80 100μL水。
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3.根据权利要求1所述的一种用于检测黄曲霉毒素B1的比色传感器,其特征在于,SH‑Aptamer 2激活体系与MoS2/Au溶液的用量,以体积比为1:1~3:1。
4.根据权利要求1‑3任意一项所述的比色传感器在检测黄曲霉毒素B1中的应用,其特征在于,将比色传感器制备成检测试剂或试剂盒,以实现待测样品中黄曲霉毒素B1的定性和定量检测。
5.一种采用权利要求1所述的比色传感器检测黄曲霉毒素B1的方法,其特征在于,包括以下步骤:
将捕获探针IL@SiO2/SSM‑Apt 1加入待测样品溶液中孵育2h,置于常温下反应,待反应结束后,用镊子将捕获探针取出,放入分散有信号探针MoS2/Au‑Apt 2的PBS缓冲液中继续孵育2h;孵育结束后用适量PBS冲洗掉未结合的MoS2/Au‑Apt 2;而后将其放入TMB‑H2O2溶液,室温孵育;若溶液由无色变为蓝色,则表明待测样品溶液中存在黄曲霉毒素B1;测定反应溶液的吸光度,对照标准曲线可获得黄曲霉毒素B1浓度。