1.一种基于分裂适配体的17β‑雌二醇光电‑电化学双比率传感器的制备方法，其特征在于，包含步骤如下：（1）Au NPs溶液的制备：

将HAuCl4溶液和超纯水混合，经煮沸后加入Na3C6H5O7溶液，得到混合溶液的颜色由浅黄色逐渐变为鲜红色，继续反应一段时间后，冷却至室温，得到的溶液即为Au NPs溶液；

（2）CdTe QDs‑H1、CdTe QDs‑H2制备：（a）在磁力搅拌下，将超纯水、CdCl2·2.5H2O溶液、柠檬酸三钠、Na2TeO3溶液、MPA溶液和NaBH4混合，得到棕色溶液，调节溶液pH后持续搅拌一段时间，得到前驱体溶液；将前驱体溶液加入反应釜中进行反应，反应后得到反应溶液；将制备的反应溶液与乙醇混合后，经静置、离心、洗涤，烘干后得到固体产物，再次分散在超纯水中，得到CdTe QDs溶液；

（b）配制含1‑乙基‑（3‑二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺和N‑羟基丁二酰亚胺的PBS溶液，即混合PBS溶液；将CdTe QDs溶液与混合PBS溶液在室温下混合反应，得到活化CdTe QDs溶液；

杂交链式反应的扩增链为2条，记为H1和H2；在活化CdTe QDs溶液中加入H1，然后在室温条件下混合一段时间后，避光反应，反应后离心收集产物，然后将其分散于PBS缓冲液中，得到的混合液记为CdTe QDs‑H1；

（c）同步骤（b）的操作，区别仅在于将H1替换为H2，得到CdTe QDs‑H2；

（3）取DNA单链S1+SPT I，其分为SPT I和S1两部分，其中SPT I为分裂适配体I；S1一端连接巯基以用于与Au NPs连接；与S1碱基互补的DNA单链记为S2；

将等体积的S1+SPT I和S2混合后在金属浴中反应，合成双链DNA结构，记为dsDNA‑1；

取ITO电极经清洗处理后得到预处理ITO电极，然后步骤（1）中制备的Au NPs溶液修饰在ITO电极表面，于室温下干燥后，得到Au NPs/ITO电极；再将dsDNA‑1修饰在Au NPs/ITO电极表面，经孵育后，得到传感器dsDNA‑1/Au NPs/ITO；

（4）取DNA单链SPT II+S3，其分为SPT II和S3两部分，其中SPT II为分裂适配体II，S3为HCR的触发链；将SPT II+S3、CdTe QDs‑H1和CdTe QDs‑H2混合后，进行振荡反应，反应后得到dsDNA‑2；将dsDNA‑2与17β‑雌二醇标准溶液混合，得到混合溶液；随后将混合溶液修饰在步骤（3）制得的dsDNA‑1/Au NPs/ITO表面，于室温孵育后，用PBS溶液冲洗 ， 冲洗后的电极记为E2+dsDNA‑2/dsDNA‑1/Au NPs/ITO；最后，在电极表面修饰MB溶液，在室温条件下吸附反应后，再经洗涤后，得到MB/E2+dsDNA‑2/dsDNA‑1/Au NPs/ITO。

2.根据权利要求1所述的基于分裂适配体的17β‑雌二醇光电‑电化学双比率传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述HAuCl4溶液、超纯水和Na3C6H5O7溶液的用量关系为‑1

200 μL：25 mL：0.25 mL，其中HAuCl4溶液的浓度为0.1 mol·L ，Na3C6H5O7溶液的浓度为‑1

0.1 g·mL ；继续反应一段时间为15‑20 min。

3.根据权利要求1所述的基于分裂适配体的17β‑雌二醇光电‑电化学双比率传感器的制备方法，其特征在于，步骤（a）中，所述超纯水、CdCl2·2.5H2O溶液、柠檬酸三钠、Na2TeO3溶液、MPA溶液和NaBH4混合的用量关系为42 mL:4 mL:0.1 g:4 mL:99 μL:50 mg，其中‑1 ‑1CdCl2·2.5H2O溶液的浓度为0.04 mol·L ，Na2TeO3溶液的浓度为0.01 mol·L ，MPA溶液‑1的浓度为0.23 mol·L ；

‑1

所述调节溶液pH是用1 mol·L 的NaOH溶液缓慢调节溶液pH至8.5，持续搅拌一段时间为12 h；在反应釜中进行反应的温度为140 ℃，时间为2 h；反应溶液与乙醇混合的体积比‑1为1:1；离心的条件为：8000 rpm、10 min；所述CdTe QDs溶液的浓度为30‑60 μmol·L 。

4.根据权利要求1所述的基于分裂适配体的17β‑雌二醇光电‑电化学双比率传感器的‑1制备方法，其特征在于，步骤（b）中，PBS溶液的浓度为10 mmol·L ，pH值为7.4；1‑乙基‑（3‑‑1二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺在混合PBS溶液中的浓度为10.4 g·L ，N‑羟基丁二酰亚胺在‑1混合PBS溶液中的浓度为5.2 g·L ；CdTe QDs溶液与混合PBS溶液混合的用量关系为100 µ‑1L:400 µL；CdTe QDs溶液的浓度为10 30 µmol·L ，反应的时间为30 min。

~

5.根据权利要求1所述的基于分裂适配体的17β‑雌二醇光电‑电化学双比率传感器的‑1制备方法，其特征在于，步骤（b）中，H1和H2的浓度均为100 150 µmol·L ；H1与活化CdTe ~QDs溶液的用量关系为20 µL：500‑550 µL，室温条件下混合一段时间为5‑10 min，避光反应为4 ℃、过夜；离心的条件为：11000 rpm、30 min；所述CdTe QDs‑H1的浓度为2 8 µmol·L~‑1 ‑1

，其中PBS缓冲液的浓度为10 mmol·L ，pH值为7.4。

6.根据权利要求1所述的基于分裂适配体的17β‑雌二醇光电‑电化学双比率传感器的‑1制备方法，其特征在于，步骤（3）中S1+SPT I和S2的浓度均为2 8 µmol·L ，在金属浴中反~应温度为20 50 ℃，反应时间为0.8 1.5 h；

~ ~

ITO电极经清洗处理具体为：用NaOH溶液、乙醇和超纯水依次清洗，其中NaOH溶液浓度‑1为1 mol·L ；Au NPs溶液修饰的体积为15 25 μL，dsDNA‑1修饰的体积为8 20 μL，其浓度~ ~‑1

为1 4 µmol·L ；孵育的温度为2 8 ℃，时间为10 16 h。

~ ~ ~

7.根据权利要求1所述的基于分裂适配体的17β‑雌二醇光电‑电化学双比率传感器的‑1制备方法，其特征在于，步骤（4）中SPT II+S3的浓度为8 15 µmol·L ，CdTe QDs‑H1的浓度‑1 ‑~1为2 8 µmol·L ，CdTe QDs‑H2的浓度为2 8 µmol·L ， SPT II+S3、CdTe QDs‑H1和CdTe ~ ~QDs‑H2的体积比为1:2:2；振荡反应的时间为30‑60 min。

8.根据权利要求1所述的基于分裂适配体的17β‑雌二醇光电‑电化学双比率传感器的制备方法，其特征在于，步骤（4）中dsDNA‑2与17β‑雌二醇标准溶液的体积比1 5:1，17β‑雌‑1 ‑1 ~二醇标准溶液的浓度范围为0.1 pg·mL 10000 pg·mL ，混合溶液修饰的体积为15 25 ~ ~‑1

μL，室温孵育的时间为1.8 2.5 h，MB溶液修饰的体积为15 25 μL，浓度为30 60 µmol·L ，~ ~ ~‑1

吸附反应的时间为2 10 min；PBS缓冲液的浓度为10 mmol·L ，pH值为7.4。

~

9.根据权利要求1‑8任一项所述方法制备的基于分裂适配体的17β‑雌二醇光电‑电化学双比率传感器用于检测17β‑雌二醇的用途，其特征在于，步骤如下：S1、标准曲线的构建：

基于MB/E2+dsDNA‑2/dsDNA‑1/Au NPs/ITO进行光电化学测试和电化学测试，得到光电

3‑/4‑

化学信号和电化学信号；其中光电流记为IPEC，MB的氧化还原电流记为IMB，[Fe(CN)6] 的

3‑/4‑ 3‑/4‑

氧化还原电流记为I[Fe(CN)6] ；以17β‑雌二醇的浓度对应双比率信号IMB/I[Fe(CN)6] 和

3‑/4‑

IPEC/I[Fe(CN)6] 建立2个标准线性曲线；

S2、实际样品17β‑雌二醇的检测：

首先制备获取样品液；按照步骤（4）的步骤，区别仅在于将17β‑雌二醇标准溶液替换为样品液，即将dsDNA‑2与样品液混合，得到混合溶液；随后将混合溶液修饰在步骤（3）制得的dsDNA‑1/Au NPs/ITO表面，于室温孵育后，用PBS溶液冲洗，冲洗后的电极记为E2+dsDNA‑2/dsDNA‑1/Au NPs/ITO；最后，在电极表面修饰MB溶液，在室温条件下吸附反应后，再经洗涤后，得到样品液处理后的MB/E2+dsDNA‑2/dsDNA‑1/Au NPs/ITO；经光电化学测试和电化学

3‑/4‑

测试，得到光电化学信号和电化学信号，将得到双比率信号IMB/I[Fe(CN)6] 和IPEC/

3‑/4‑

I[Fe(CN)6] ，代入步骤S1的标准线性曲线，实现对待测样品17β‑雌二醇的检测。

10.根据权利要求9所述的用途，步骤S2中dsDNA‑2与样品液的体积比1 5:1，混合溶液~修饰的体积为15 25 μL，室温孵育的时间为1.8 2.5 h，MB溶液修饰的体积为15 25 μL，浓~ ~ ~‑1 ‑1

度为30 60 µmol·L ，吸附反应的时间为2 10 min；PBS缓冲液的浓度为10 mmol·L ，pH~ ~值为7.4；

步骤S1和S2中光电化学测试和电化学测试由型号为MC‑TCX300氙灯光源系统和Autolab PGSTAT 302N电化学工作站分别测量记录电化学与光电化学信号；其中，光电化学‑1测试在0.1 mol·L 、pH=7.4的PBS缓冲溶液中进行测试，外加偏置电压为0 V；电化学测试‑1 3‑/4‑ ‑1在0.6 mL的5 mmol·L  [Fe(CN)6] 和5.4 mL的0.1 mol·L 、pH=7.4的PBS缓冲溶液的混合溶液中进行，电位范围为‑0.4 V 0.6 V。

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