2+ 2+

1.基于电场调控传感界面适配体取向的Pb 、Hg 同时比率电化学检测方法，其特征在于，包含步骤如下：(1)无标记电化学探针AQ‑cDNA复合溶液的制备：(a)首先将蒽醌用磷酸盐缓冲溶液溶解，经搅拌后得到AQ分散液；然后在AQ分散液中加入1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和N‑羟基丁二酰亚胺溶液活化蒽醌的羧酸基团，得到AQ活化液；

(b)将cDNA用三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液溶解，得到cDNA溶液；然后将AQ活化液与cDNA溶液混合，经磁力搅拌得到AQ‑cDNA复合溶液；

(2)二茂铁标记的线性适配体记为Fc‑apt，亚甲基蓝标记的线性适配体记为MB‑apt；将Fc‑apt溶液与MB‑apt溶液混合，混合后的溶液记为Fc‑apt‑MB‑apt溶液；然后将步骤(1)的AQ‑cDNA复合溶液与Fc‑apt‑MB‑apt溶液混合，通过PCR进行扩增反应，反应后的溶液记为PCR‑DNA；

(3)将玻碳电极依次用不同粒径的三氧化二铝粉末打磨，打磨后的玻碳电极分别在乙醇和水中超声后于空气中干燥，得到处理后的玻碳电极；

(4)将金纳米粒子溶液修饰在步骤(3)处理后的玻碳电极的传感界面上，修饰后的材料，记为AuNPs/GCE；

(5)将步骤(2)得到的PCR‑DNA修饰在步骤(4)制备AuNPs/GCE的传感界面上，孵育固定后获得基于Fc‑apt‑MB‑apt的双比率电化学适配体传感器，记为PCR‑DNA/AuNPs/GCE；

(6)将MCH溶液修饰在步骤(5)所制得的PCR‑DNA/AuNPs/GCE材料的电极表面，在室温下孵育一段时间后，得到的材料记为MCH/PCR‑DNA/AuNPs/GCE；

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(7)在步骤(6)所制备的MCH/PCR‑DNA/AuNPs/GCE电极表面修饰含有不同浓度的Pb 和2+ 2+ 2+

Hg 混合标准溶液，并在不同静电场条件下电驱动预富集Pb 和Hg ，富集后得到的电化学2+ 2+

生物传感器记为Pb &Hg /MCH/PCR‑DNA/AuNPs/GCE；

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(8)标准曲线的构建：以步骤(7)制备得到的传感器Pb &Hg /MCH/PCR‑DNA/AuNPs/GCE为工作电极，饱和Ag/AgCl电极为参比电极，铂丝电极为对电极，置于静电场中进行电化学2+ 2+

检测，得到最终电化学检测电流值；根据检测的电流值和相对应混合标准溶液中Pb 和Hg浓度的对数，分别构建得到标准曲线；

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(9)实际样品中Pb 和Hg 的检测：首先制备样品液，将样品液滴加在步骤(6)制备得到的传感器MCH/PCR‑DNA/AuNPs/GCE电极表面，置于静电场中通过电化学测试得到相应的电2+ 2+

流值；然后将电流值代入步骤(8)构建的标准曲线，即可获知实际样品中Pb 和Hg 的浓度，2+ 2+

实现实际样品中Pb 和Hg 的检测。

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2.根据权利要求1所述的基于电场调控传感界面适配体取向的Pb 、Hg 同时比率电化学检测方法，其特征在于，步骤(1)的(a)中，所述搅拌的时间为12h；所述AQ分散液的浓度为‑10.1mg mL ，所述1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和N‑羟基丁二酰亚胺溶液的浓度分别为10mM和5mM；磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.1M；所述AQ分散液、1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和N‑羟基丁二酰亚胺溶液的体积比为2：1：1；

步骤(1)的(b)中，所述cDNA溶液的浓度为2～16μM；所述AQ活化液与cDNA溶液的体积比为1～4:1；三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液的浓度为0.1M；所述AQ活化液与cDNA混合后磁力搅拌的时间为2h；AQ‑cDNA复合溶液中cDNA的终浓度为1～8μM。

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3.根据权利要求1所述的基于电场调控传感界面适配体取向的Pb 、Hg 同时比率电化学检测方法，步骤(2)中，所述Fc‑apt、MB‑apt的浓度均为20μM，Fc‑apt与MB‑apt按照1:1体积比混合；所述AQ‑cDNA复合溶液与Fc‑apt‑MB‑apt溶液混合的体积比为1:1；

所述PCR进行扩增反应一定温度条件为95℃，反应时间为2min，然后4℃快速退火10min。

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4.根据权利要求1所述的基于电场调控传感界面适配体取向的Pb 、Hg 同时比率电化学检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述玻碳电极的直径d＝3mm；所用的三氧化二铝粉末的粒径依次为0.3μm、0.05μm；所述超声时间均为30s。

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5.根据权利要求1所述的基于电场调控传感界面适配体取向的Pb 、Hg 同时比率电化学检测方法，其特征在于，步骤(4)中，所述金纳米粒子溶液修饰的用量为6μL，浓度为5μM。

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6.根据权利要求1所述的基于电场调控传感界面适配体取向的Pb 、Hg 同时比率电化学检测方法，其特征在于，步骤(5)中，所述PCR‑DNA修饰的用量为6μL，浓度为0.5～4.0μM；

所述孵育的温度为4℃，孵育的时间为10～12h。

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7.根据权利要求1所述的基于电场调控传感界面适配体取向的Pb 、Hg 同时比率电化学检测方法，其特征在于，步骤(6)中，所述MCH溶液的用量为6μL，浓度为0.1M；所述孵育一段时间为40～60min。

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8.根据权利要求1所述的基于电场调控传感界面适配体取向的Pb 、Hg 同时比率电化2+ 2+ ‑13

学检测方法，其特征在于，步骤(7)中，所述混合标准溶液中Pb 和Hg 的浓度均为1×10‑8 2+ 2+～1×10 M，所述含有不同浓度的Pb 和Hg 混合标准溶液的修饰用量为6μL；

所述在不同静电场条件下电驱动预富集的具体步骤：在0～3V静电场中预富集10～60min。

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9.根据权利要求1所述的基于电场调控传感界面适配体取向的Pb 、Hg 同时比率电化学检测方法，其特征在于，步骤(8)中，电化学检测的具体条件为：在0.1M、pH＝7.4的PBS缓冲溶液中进行测试；扫描电压范围‑0.4～0.8V，振幅为0.025V，频率为25Hz；所述静电场的条件为0～3V。

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10.根据权利要求1所述的基于电场调控传感界面适配体取向的Pb 、Hg 同时比率电化学检测方法，其特征在于，步骤(9)中，电化学测试的具体条件为：在0.1M、pH＝7.4的PBS缓冲溶液中进行测试；扫描电压范围‑0.4～0.8V，振幅为0.025V，频率为25Hz；所述静电场的条件为0～3V。