利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2023102902555
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种全发酵法高产L‑甲硫氨酸产量的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:以产L‑甲硫氨酸重组大肠杆菌为生产菌株,接种至含50mg/L卡那霉素抗性的发酵培养基中,培养温度为37℃,发酵时搅拌转速300‑1000r/min;通过搅拌和通风控制溶氧值在20‑30%,通过流加氨水控制pH在6.75‑6.85;发酵至OD600达到0.6‑0.8时加入终浓度24mg/L的IPTG,在30℃、300‑1000r/min条件下进行诱导培养;发酵过程中,每4h取样检测OD600、残糖含量和L‑甲硫氨酸含量;在发酵至发酵液初始葡萄糖浓度低于2g/L后,采用溶氧反馈方式流加补料培养基维持溶氧值在20‑30%;当OD600达到10时以10‑20mL/h的恒定流速流加补料培养基维持溶氧值在20‑30%;当OD600达到30时以20‑30mL/h的恒定流速流加补料培养基维持溶氧值在20‑30%;当OD600达到45时以25‑40mL/h的恒定流速流加补料培养基维持溶氧值在20‑

30%;发酵后期,菌体逐渐死亡,溶氧值上升,当溶氧值上升至50%及以上停止流加;当溶氧值达到100%时发酵结束;

所述发酵培养基:葡萄糖10g/L、CaCl2·2H2O 0.08g/L、MgSO4·7H2O 5g/L、柠檬酸2.5g/L、KH2PO4 2.5g/L、K2HPO4·3H2O 1.38g/L、FeCl3·6H2O 0.12g/L、(NH4)2SO4 3.3g/L、Na2S2O3 

3.95g/L、0.01g/L的VB12、0.01g/L的VB1、0.05g/L的L‑赖氨酸、SSA 2mL/L、SSB 1mL/L;

补料培养基:葡萄糖500g/L、MgSO4·7H2O 5g/L、FeCl3·6H2O 0.06g/L、(NH4)2SO4 33g/L、Na2S2O3 39.5g/L、甜菜碱0.5g/L、SSA 1.6mL/L、SSB 0.8mL/L、0.01g/L的VB12、0.01g/L的VB1、0.05g/L的L‑赖氨酸,溶剂为水;

所述SSA组成为:ZnSO4·7H2O 8.5g/L、MnCl2·2H2O 7.5g/L、CuCl2·2H2O 0.75g/L、CoCl2·6H2O 1.25g/L、EDTA 4g/L,溶剂为水。

所述SSB组成为:H3BO3 3g/L、Na2MoO4·2H2O 2.5g/L,溶剂为水。

2.如权利要求1所述全发酵法高产L‑甲硫氨酸产量的方法,其特征在于,所述生产菌株为大肠杆菌(Escherichia coli)CCTCC NO:M 2020846。

3.如权利要求1所述全发酵法高产L‑甲硫氨酸产量的方法,其特征在于,当OD600达到10时以15mL/h的恒定流速流加补料培养基维持溶氧值在20‑30%;当OD600达到30时以20mL/h的恒定流速流加补料培养基维持溶氧值在20‑30%;当OD600达到45时以25mL/h的恒定流速流加补料培养基维持溶氧值在20‑30%;发酵后期,菌体逐渐死亡,溶氧值上升,当DO值上升至50%及以上停止流加;当溶氧值达到100%时发酵结束。

4.如权利要求1所述全发酵法高产L‑甲硫氨酸产量的方法,其特征在于,所述生产菌株在接种前先进行斜面活化和种子扩大培养基,将种子液以体积浓度10‑15%的接种量接种至发酵培养基;所述种子液按如下步骤制备:(1)活化培养:将生产菌株接种到LB平板培养基上,37℃培养过夜,得到活化菌;所述LB平板培养基组成:蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、NaCl 5g/L,琼脂粉20g/L,溶剂为水,pH=

6.8‑7.0;

(2)一级种子培养:将步骤(1)得到的活化菌接种于LB液体培养基中,37℃、200rpm培养

12h,得到一级种子液;LB液体培养基组成:蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、NaCl 5g/L,溶剂为水,pH=6.8‑7.0;

(3)二级种子培养:将步骤(2)得到的一级种子液按体积浓度1‑3%的接种量接种于LB液体培养基中,37℃、200rpm培养12‑16h,得到二级种子液;所述LB液体培养基组成同步骤(2)。