1.一种D‑阿洛酮糖3差向异构酶突变体,由序列如SEQ ID NO.2所示的氨基酸经突变获得,所述突变位点为第13位氨基酸。
2.如权利要求1所述的D‑阿洛酮糖3差向异构酶突变体,其特征在所述D‑阿洛酮糖3差向异构酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
3.编码权利要求1所述D‑阿洛酮糖3差向异构酶突变体的基因。
4.含有权利要求3所述编码基因的重组菌。
5.权利要求1或2所述D‑阿洛酮糖3差向异构酶突变体在微生物催化D‑果糖异构化制备D‑阿洛酮糖的应用。
6.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述应用为:以含D‑阿洛酮糖3差向异构酶突变体基因的重组基因工程菌经摇瓶发酵诱导培养获得的湿菌体为酶源,以D‑果糖为底物,以钴离子为助催剂,以pH9.0的缓冲液为反应介质,在50~90℃、100~200r/min条件下反应,反应完全后,获得D‑果糖和D‑阿洛酮糖混合物。
7.如权利要求7所述的应用,其特征在于反应体系中,湿菌体用量为50~150g/L,钴离子终浓度为0.1~10mM,底物初始浓度为50~500g/L。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备获得:将含D‑阿洛酮糖3差向异构酶突变体基因的重组基因工程菌接种至含终浓度50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃、200r/min培养至OD600=0.8~1.0,获得种子液;种子液以体积浓度1~
5%的接种量转入含终浓度50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,于37℃、180r/min培养至OD600=0.6~0.8,添加终浓度0.1mM的IPTG,于28℃、180r/min诱导培养12~14h,获得诱导培养菌悬液,将诱导培养菌悬液离心,收集得到湿菌体。