1.一种耐高温D-阿洛酮糖3-差向异构酶,其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.一种耐高温D-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体,由序列如SEQ ID NO.3所示氨基酸经定点突变而来,所述突变的位点为下列中的一个或多个:(1)第106位、(2)第183位、(3)第
211位、(4)第276位。
3.如权利要求1所述的耐高温D-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体,其特征在于所述耐高温D-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体由序列如SEQ ID NO.3所示氨基酸经下列之一或多个位点突变而得:(1)第106位甘氨酸G突变为异亮氨酸I、脯氨酸P或组氨酸H;(2)第183位天冬氨酸D突变为谷氨酰胺Q、天冬酰胺N、脯氨酸P或色氨酸W;(3)第211位甘氨酸G突变为酪氨酸Y、丝氨酸S或缬氨酸V;(4)第276位丙氨酸A突变为天冬酰胺N、赖氨酸K或半胱氨酸C。
4.如权利要求2所述的耐高温D-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体其特征在于所述耐高温D-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体由序列如SEQ ID NO.3所示氨基酸经下列之一或多个位点突变而得:(1)第106位甘氨酸G突变为组氨酸H;(2)第183位天冬氨酸D突变为色氨酸W;(3)第211位甘氨酸G突变为缬氨酸V;(4)第276位丙氨酸A突变为赖氨酸K。
5.如权利要求3所述的耐高温D-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体,其特征在于所述耐高温D-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体序列如SEQ ID NO.7所示。
6.权利要求1~4之一所述耐高温D-阿洛酮糖3-差向异构酶及突变体在催化D-果糖异构化制备D-阿洛酮糖中的应用中。
7.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述应用为:以含耐高温D-阿洛酮糖3-差向异构酶及突变体编码基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体经超声破碎后获得的上清液或菌体细胞经固定化获得的固定化酶制剂作为催化剂,以D-果糖为底物,在Co2+和Mg2+存在下,在pH70~8.0的Na2HPO4/NaH2PO4缓冲液中,80~100℃温度下反应,反应结束后,反应液分离纯化,获得D-阿洛酮糖。
8.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述耐高温D-阿洛酮糖3-差向异构酶编码基因序列如SEQ ID NO.4所示。
9.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述耐高温D-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体编码基因序列如SEQ ID NO.8所示。