1.一种基于“Cu(II)to Cu(II)”机理的组蛋白乙酰转移酶电化学传感器的用途,其特征在于,应用于CoA和HAT活性检测及其抑制剂的筛选,具体步骤如下:(1)CoA‑Cu(II)复合物的制备
依次取1~10μL终浓度为50~500μM的Cu(NO3)2溶液,1~20μL终浓度为0.01~150μM CoA溶液,与100mM pH 7.0的PBS缓冲溶液配成0.1~1mL的溶液,将溶液剧烈振荡5~15min,即得到CoA‑Cu(II)复合物;
(2)电化学生物传感器的制备
a.GCE:将玻碳电极在麂皮上依次用1、0.3和0.05μm的三氧化二铝粉末抛光打磨1~
5min,之后再依次用水、乙醇超声洗涤1~5min,然后用氮气吹干备用,该电极标记为GCE;
b.GO/GCE:将4.0~8.0mg石墨烯分散于2.0~10.0mL浓度为0.1~0.3M的pH 5.0~6.0的醋酸缓冲溶液,于超声清洗器中超声分散2~5h,得到石墨烯分散液;利用循环伏安法,电位范围为‑2~2V,扫速为10mV/s,重复扫描10~20圈,将上述石墨烯电沉积到GCE得到石墨烯修饰玻碳电极,标注为GO/GCE;
c.CoA‑Cu(II)/GO/GCE:取5.0~10μL步骤(1)中合成的CoA‑Cu(II)复合物滴加在GO/GCE表面,于室温静置0.1~1.0h,用PBS缓冲溶液缓缓冲洗电极以去除过量的复合物,该电极标记为CoA‑Cu(II)/GO/GCE;
利用电化学快速扫描循环伏安法(FSCV)进行扫描,设置初始电位为‑1.5~‑0.3V,终止电位为‑0.2~0.4V,扫描速度10~400V/s,使用PBS缓冲溶液作为电解质溶液,实现对CoA和HAT活性检测及其抑制剂的筛选。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,应用于CoA活性检测的具体步骤为:通过在权利要求1中制备方法步骤(1)中,改变CoA浓度,与Cu(NO3)2溶液按不同比例进行配位聚合,形成若干CoA‑Cu(II)复合物,保持步骤(2)不变,基于此能得到一系列CoA电化学传感器,并应用于CoA电化学传感分析;其中,所述改变CoA浓度为使CoA终浓度范围为0~150μM。
3.权利要求1所述的用途,其特征在于,应用于HAT活性检测的具体步骤为:将权利要求
1中制备方法步骤(1)中更新为,依次加入1~5μL终浓度为0~500ng/mL的HAT溶液,1~5μL终浓度为50~250μM的乙酰辅酶A,1~5μL终浓度为20~100μM的底物多肽溶液,加75~96μL
100mM pH 7.0的PBS缓冲溶液,在搅拌器剧烈搅拌2~5min,然后于25~35℃温和反应0.5~
2h后,加入1~10μL终浓度为50~500μM的Cu(NO3)2溶液,混合均匀后置于25~50℃下孵育5~15min,并于4℃冷藏保存;步骤(2)保持不变,基于此得到一系列HAT电化学传感器,并应用于HAT电化学传感分析。
4.根据权利要求2所述的用途,其特征在于,CoA检测限为6.3nM。
5.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,HAT的检测限为6.8pg/mL。