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专利号: 2018103236936
申请人: 宁波大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种检测组蛋白乙酰转移酶活性的电化学法拉第笼免疫传感器的构建方法及应用,其特征在于该电化学免疫传感器通过以下方法构建的:

首先,制备peptide/Au:分别取乙酰转移酶p300与多肽、乙酰辅酶A在PBS(0.1M,pH7.0)中充分混合,于恒温水浴锅中孵育。取催化反应液滴涂于金电极表面,4℃冰箱中孵育;其次,制备MB&AuNPs@GO-Ab:将HAuCl4,CTAB与水混合,向反应混合物中加入抗坏血酸,然后加入NaOH,得到CTAB覆盖的AuNPs。离心、纯化后分散在等量水中,再向溶液中加入GO超声分散,静置备用,随后加入乙酰基抗体孵育,最后加入MB震荡混合均匀;(3)制备电化学法拉第笼免疫传感器:取MB&AuNPs@GO-Ab滴涂于peptide/Au表面,室温下孵育,随后将制得的传感器置于PBS(0.1M,pH7.0)中进行电化学SWV测试。

2.如权利要求1所述的电化学法拉第笼免疫传感器的构建方法及应用,其特征是,制备多肽/金电极(peptide/Au)的具体方法是:分别取乙酰转移酶p300(50~150nM,1~3μL)与底物多肽(0.5~1.5mM,0.2~1.6μL),乙酰辅酶A(0.5~1.5mM,0.5~1.5μL)在磷酸缓冲溶液(PBS)中(0.1M,pH7.0)充分混合,总体积10μL。将反应液置于25~35℃恒温水浴锅中孵育

15~45min。取p300催化反应液3~7μL,滴涂于金电极表面,4℃冰箱中孵育4~10h。

3.如权利要求1所述的电化学法拉第笼免疫传感器的构建方法及应用,其特征是,合成纳米金(AuNPs)的具体方法是;将氯金酸(HAuCl4)(0.01~0.1M,0.025~0.25mL),十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)(0.1~0.5M,0.2~1mL)与水(6.05~10.55mL)混合,向反应混合物中加入抗坏血酸(0.05~0.5M,0.02~0.2mL),然后加入氢氧化钠(0.05~0.5M,0.02~

0.2mL)。将溶液轻轻旋转10s,静置1~3h,得到CTAB包覆的AuNPs,7000rpm离心8~12min,纯化后分散在等量水中。

4.如权利要求1、3所述的电化学法拉第笼免疫传感器的构建方法及应用,其特征是,制备纳米金/氧化石墨烯复合材料(AuNPs@GO)的具体方法是:取0.5~5mg GO加入到0.5~5mL上述AuNPs溶液中,超声分散2~6h,随后静置0.5~3.5h备用。

5.如权利要求1、3、4所述的电化学法拉第笼免疫传感器的构建方法及应用,其特征是,制备亚甲基蓝固化的纳米金/石墨烯/乙酰基抗体复合材料(MB&AuNPs@GO-Ab)的具体方法是:取上述AuNPs@GO溶液5~15μL,加入乙酰基抗体(Ab)(0.5×10-3~1.5×10-3mg/L,2.5~

7.5μL),30~40℃下孵育2~6h,再加入MB(0.05~0.2mM,2.5~7.5μL)混合震荡0.5~1.5h。

6.如权利要求1~5所述的电化学法拉第笼免疫传感器的构建方法及应用,其特征是,制备电化学法拉第笼免疫传感器的具体方法是:取MB&AuNPs@GO-Ab 2.5~7.5μL滴涂于peptide/Au表面,室温下孵育15~45min,将所制备的传感器置于PBS(0.1M,pH7.0)中进行电化学响应实验。

7.如权利要求1~6所述的电化学法拉第笼免疫传感器的构建方法及应用,其特征是,利用上述制备的电化学免疫传感器实现p300活性检测及其小分子抑制剂的筛选,通过方波伏安法(SWV),设置电位范围为-0.4~-0.05V,检测传感器在PBS(0.1M,pH7.0)中的电化学催化MB的SWV响应,获得一系列不同浓度的p300或不同浓度的小分子抑制剂对应的电流大小,探究电流响应与p300浓度或小分子抑制剂之间的关系。