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专利号: 2019102877167
申请人: 宁波大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.基于金钯纳米花/石墨烯复合材料的组蛋白乙酰转移酶计时-电流传感器及其应用,其特征在于,机理如下:利用乙酰基抗体-金钯纳米花/石墨烯复合材料,通过计时-电流法构建了一种新型的无酶电化学传感器,用于检测组蛋白乙酰转移酶活性。金钯纳米花/石墨烯复合材料有两个作用:通过大的比表面积以提高乙酰基抗体的固载量;利用纳米材料本身的催化性质,构建模拟酶实现信号的放大。

2.基于金钯纳米花/石墨烯复合材料的组蛋白乙酰转移酶计时-电流传感器及其应用,具体步骤如下:(1)乙酰基抗体-金钯纳米花/石墨烯复合材料(AbAc-AuPd@GO)的制备将0.1~1g石墨烯(GO)分散在10~30mL去离子水超声0.1~1h,再加入1~5mL0.1~3g/L的氯金酸(HAuCl4)溶液和1~5mL 0.1~3g/L的氯钯酸(H2PdCl4)溶液,磁力均匀搅拌0.1~

1h,置于氙弧灯下照射0.1~1h,再转入干燥箱中,30~100℃反应10~36h。最后,将样本置于氢气管式炉中100~500℃反应0.5~5h。将制备的AuPd@GO分散在去离子水中得到0.1~

5mg/mL的AuPd@GO分散液,备用。

取1~300μL 0.1~5g/L乙酰基抗体(AbAc)置于氦氖激光治疗仪中照射5~60s,再添加到0.1~3mL上述AuPd@GO分散液中,30~42℃反应1~8h。

(2)组蛋白乙酰转移酶计时-电流传感器的制备

a.Au

金电极(Au)使用前分别用直径为0.1~0.5μm和0.01~0.1μm的Al2O3粉末进行打磨,利用超纯水通过超声清洗1~5次,之后置于氮气流中干燥,再将其浸泡于0.01~0.5M H2SO4溶液中,在(-0.1~0.5)V~(+0.5~1.5)V范围内进行循环伏安扫描5~30min,最后再经超纯水清洗后氮气吹干备用。

b.peptide/Au

将5~20μL 0.01~1mM底物多肽(peptide)滴涂于处理好的Au表面反应1~8h,通过Au-S键固定的底物多肽自组装单分子层,随后蒸馏水缓缓冲洗电极,再滴涂5~20μL组蛋白乙酰转移酶反应液【HAT p300(200~1000nM,1~5μL)与乙酰辅酶A(1~5mM,1~5μL)在磷酸缓冲溶液(PBS)中充分混合】,将电极置于25~37℃恒温箱中孵育30~120min。

c.AbAc-AuPd@GO/peptide/Au

取(1)中制备的AbAc-AuPd@GO溶液2~12μL滴涂于peptide/Au电极上,30~42℃下静置

10~60min,随后蒸馏水缓缓冲洗电极,之后用于计时-电流检测。

3.根据权利要求1~2所述的电化学传感器的制备,其特征在于联合新型金钯纳米花/石墨烯复合材料和计时-电流法来实现p300的电化学检测。

4.根据权利要求1~3所述的计时-电流传感器的制备,可以实现不同浓度p300的检测,检测限低至0.37pM。

5.根据权利要求1~4所述的电化学传感器的制备,对p300小分子抑制剂C646进行检测,半抑制浓度为29.5μM。