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专利号: 2018110851253
申请人: 苏州健雄职业技术学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-05-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种检测蛋白质乙酰转移酶活性的电化学方法,其特征在于:P1修饰的金电极和p300蛋白的检测体系中加入P2模板化银纳米粒子和葫芦[8]脲,通过电化学测量检测p300蛋白的活性,从而得到蛋白质转移化酶活性;所述P1的氨基酸序列为:11-巯基十一烷酸-GGGFRGKGGKGLGKGGAKA;所述P2的氨基酸序列为:FGGGASLWWSEKL。

2.根据权利要求1所述的检测蛋白质乙酰转移酶活性的电化学方法,其特征在于:所述P1修饰的金电极的制备方法:包括以下步骤:(1)金电极在麂皮上依次用1μm,0.3μm和0.05μm氧化铝悬浊液打磨成镜面;

(2)用H2SO4:H2O2为3:1的溶液浸泡清洗;

(3)金电极分别在双蒸水和乙醇中超声清洗;

(4)金电极在50%硝酸中浸泡30min,然后在0.5M的H2SO4中电化学清洗,扫描电压从0V至

1.5V,循环30次;

(5)金电极用氮气吹干,再将金电极浸入100μL,0.5μM的P1溶液,浸泡16h后,金电极温育在1mM的巯基己醇30min,之后双蒸水清洗,得所述P1修饰的金电极。

3.根据权利要求2所述的检测蛋白质乙酰转移酶活性的电化学方法,其特征在于:所述P1溶液中加入磷酸三氯乙酯。

4.根据权利要求1所述的检测蛋白质乙酰转移酶活性的电化学方法,其特征在于:所述P2模板化银纳米粒子的合成方法,包括以下步骤:将0.2mM的AgNO3和100ng/μL的P2混合在

5mL的水溶液中,磁力搅拌20min;混合溶液中加入2mM的NaBH4,磁力搅拌10min,得所述P2模板化银纳米粒子。

5.根据权利要求1所述的检测蛋白质乙酰转移酶活性的电化学方法,其特征在于:所述电化学测量检测包括以下步骤:(1)所述P1修饰的金电极于30℃温育在p300蛋白和100μM乙酰辅酶A溶液中1h,使用清洗液清洗;

(2)P1修饰的金电极浸入100μL,2.5U/mL的羧肽酶Y溶液中,室温下反应45min;

(3)使用清洗液清洗之后,P1修饰的金电极电极与10μM的葫芦[8]和P2模板化银纳米粒子反应1h,进行电化学测量。

6.根据权利要求5所述的检测蛋白质乙酰转移酶活性的电化学方法,其特征在于:电化学测量后的P1修饰的金电极用清洗液洗净,进行下次的电化学测量。

7.根据权利要求5或6所述的检测蛋白质乙酰转移酶活性的电化学方法,其特征在于:所述清洗液为20mM的Tris-HCl,所述清洗液中还含有0.1M的NaCl以及1.0%的Tween-20;所述清洗液的pH为7.4。

8.根据权利要求1所述的检测蛋白质乙酰转移酶活性的电化学方法,其特征在于:所述电化学测量检测包括线性扫描伏安法和电化学交流阻抗谱。

9.根据权利要求8所述的检测蛋白质乙酰转移酶活性的电化学方法,其特征在于:所述P1修饰的金电极作为工作电极,Ag/AgCl电极和铂电极分别作为参比电极和对电极,电化学交流阻抗谱的工作条件为:偏电压0.224V,振幅5-mV,频率范围0.1Hz至10kHz;线性扫描伏安法扫描,工作溶液1M的KCl,工作电压-0.01至0.13V。