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专利号: 2022111926342
申请人: 西藏自治区农牧科学院农业研究所
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-01
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种转基因青稞阳性材料的建立方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)选择种胚露白长度3mm的青稞种子,刺胚1‑3次,在真空环境下侵染30min接种根癌农杆菌;

o

(2)侵染结束后的种子在24±2C培养室中黑暗条件下培养2天;

(1)选择种胚露白长度3mm的青稞种子,不刺透刺胚1‑3次,在真空环境下侵染40min接种根癌农杆菌;

o

(2)侵染结束后的种子在24±2C培养室中黑暗条件下培养2天;

(1)选择种胚露白长度3mm的青稞种子,刺透刺胚1‑3次,在真空环境下侵染40min接种根癌农杆菌;

o

(2)侵染结束后的种子在24±2C培养室中黑暗条件下培养3天;

(1)选择种胚露白长度5mm的青稞种子,刺胚1‑3次,在真空环境下侵染40min接种根癌农杆菌;

o

(2)侵染结束后的种子在24±2C培养室中黑暗条件下培养2天;

(1)选择种胚露白长度5mm的青稞种子,刺透刺胚1‑3次,在真空环境下侵染40min接种根癌农杆菌;

o

(2)侵染结束后的种子在24±2C培养室中黑暗条件下培养3天;

上述步骤(2)中所述培养是将侵染结束后的种子接种于共培养培养基培养;所述共培养培养基是含有如下浓度的添加剂的MS培养基:

2,4‑二氯苯氧乙酸 1 3 mg/L、激动素 0.1 0.5 mg/L、甘露醇 8 12 g/L、脯氨酸 0.3~ ~ ~ ~

0.8 g/L、谷氨酰胺 0.3 0.8 g/L、水解酪蛋白 0.5 1 g/L、五水硫酸铜 1 1.5 mg/L、蔗糖 ~ ~ ~

25 35 mg/L、乙酰丁香酮 90 110μmol/L。

~ ~

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述共培养培养基是含有如下浓度的添加剂的MS培养基:2,4‑二氯苯氧乙酸 1.5 mg/L、激动素 0.2 mg/L、甘露醇 10 g/L、脯氨酸 0.5 g/L、谷氨酰胺 0.5 g/L、水解酪蛋白 0.8 g/L、五水硫酸铜 1.25 mg/L、蔗糖 30 mg/L、乙酰丁香酮100μmol/L。

3.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述MS培养基是MS固体培养基,所述添加剂还含有植物凝胶。

4.一种转基因青稞的培养方法,其特征在于,包含如下步骤:

1)将权利要求1所述的转基因青稞阳性材料接种到选择萌发培养基中培养,筛选得到萌发的植株;

2)将步骤1)得到的萌发的植株转入选择成苗培养基培养,获得转基因青稞;

所述选择萌发培养基是含有如下浓度的添加剂的MS培养基:

2,4‑二氯苯氧乙酸1 3 mg/L、激动素 0.1 0.5 mg/L、甘露醇 8 12 g/L、脯氨酸 0.3~ ~ ~ ~

0.8 g/L、谷氨酰胺 0.3 0.8 g/L、水解酪蛋白 0.5 1 g/L、五水硫酸铜 1 1.5 mg/L、蔗糖 ~ ~ ~

25 35 mg/L、头孢霉素 300 350 mg/L,还含有卡那霉素 100 150 mg/L或潮霉素20 80 mg/~ ~ ~ ~L;

所述选择成苗培养基是含有如下浓度的添加剂的1/2 MS培养基:α‑萘乙酸 0.3 0.8 mg/L、硫酸铵0.8 1.2 g/L、脯氨酸 0.3 0.8 g/L、谷氨酰胺 0.3~ ~ ~ ~

0.8 g/L、水解酪蛋白 0.5 1 g/L、五水硫酸铜 1.3 1.8 mg/L、蔗糖 25 35 mg/L、头孢霉素 ~ ~ ~

300 350 mg/L,还含有卡那霉素 100 150 mg/L或潮霉素20 80 mg/L。

~ ~ ~

5.如权利要求4所述的培养方法,其特征在于,所述选择萌发培养是含有如下浓度的添加剂的MS培养基:

2,4‑二氯苯氧乙酸1.5 mg/L、激动素 0.2 mg/L、甘露醇 10 g/L、脯氨酸 0.5 g/L、谷氨酰胺 0.5 g/L、水解酪蛋白 0.8 g/L、五水硫酸铜 1.25 mg/L、蔗糖 30 mg/L、头孢霉素 

300 mg/L,还含有卡那霉素 100 mg/L或潮霉素50 mg/L;

所述选择成苗培养基是含有如下浓度的添加剂的1/2 MS培养基:α‑萘乙酸 0.5 mg/L、硫酸铵1 g/L、脯氨酸 0.5 g/L、谷氨酰胺 0.5 g/L、水解酪蛋白 

0.8 g/L、五水硫酸铜 1.5 mg/L、蔗糖 30 mg/L、头孢霉素 300 mg/L,还含有卡那霉素 100 mg/L或潮霉素50 mg/L。

6.如权利要求4或5所述的培养方法,其特征在于,所述MS培养基是含有植物凝胶的MS固体培养基;所述1/2 MS培养基是含有植物凝胶的1/2 MS固体培养基。