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专利号: 2022110692291
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.土曲霉(Aspergillus terreus)HBJ5‑32,保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号:GDMCC No:62493,保藏日期2022年5月18日,地址:广东省广州市先烈中路100号大院

59号楼5楼;邮编510070。

2.一种权利要求1所述土曲霉HBJ5‑32在提取杭白菊总黄酮中的应用。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述应用的方法为:(1)将土曲霉HBJ5‑32培养获得的发酵液过滤,收集的滤液即为粗酶液;(2)将粗酶液与杭白菊粉混合,于35–40℃条件酶解4–6h,再往酶解体系中加入无水乙醇后进行超声提取,抽滤,得总黄酮提取液;(3)总黄酮提取液经减压蒸干,无水乙醇溶解,浓缩和真空干燥,得总黄酮提取物。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(1)所述粗酶液制备方法为:将土曲霉HBJ5‑32孢子接种于产酶培养基中,于30℃、200–250r/min振荡培养60–72h,发酵液过滤,滤液即为粗酶液;所述产酶培养基终浓度组成为:小麦麸皮30–40g/L,(NH4)2SO45–6g/L,KH2PO4 

3–5g/L,MgSO4·7H2O 0.5–1.0g/L,CaCl2 0.3–0.5g/L,FeSO4·7H2O 0.1–0.2g/L,溶剂为自来水,pH 6.0‑6.5。

5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述土曲霉HBJ5‑32在产酶培养前,先经平板培养基培养产生孢子,然后将孢子悬浮于生理盐水中,获得土曲霉HBJ5‑32孢子液,按体积分数6%–8%的量接入产酶培养基进行培养,所述土曲霉HBJ5‑32孢子培养方法为:将土曲霉HBJ5‑32接种于PDA平板培养基,于28–30℃培养48–60h,获得平板培养物;平板培养物中加入无菌生理盐水,用接种环搅动使孢子悬浮,获得土曲霉HBJ5‑32孢子液;所述PDA平板培养基终浓度组成为:马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L,琼脂20g/L,溶剂为自来水,pH自然。

6.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)所述粗酶液体积用量以杭白菊粉质量计为4–8mL/g。

7.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)所述杭白菊粉是将杭白菊经85℃烘干2h后粉碎,过20目筛的细粉。

8.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)无水乙醇体积用量为粗酶液体积的

3‑4倍。

9.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)所述总黄酮提取液的制备方法为:往酶解体系中加入无水乙醇,搅拌均匀后置于50–60℃水浴中浸提2–3h再转入50–60℃、100–

200W的超声波清洗机中提取30–60min;超声醇提结束后,趁热抽滤,得总黄酮提取液。

10.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(3)从总黄酮提取液中回收总黄酮提取物的方法为:总黄酮提取液于45℃、–0.1MPa条件下蒸馏至无液体流出,加入无水乙醇,充分振荡后于5000–8000r/min离心5–10min,上清液于45℃、–0.1MPa条件蒸馏至原乙醇体积的

1/10,转入到一洁净培养皿中,50℃、–0.1MPa真空干燥,得总黄酮提取物;所述无水乙醇体积用量以原料杭白菊粉质量计为5–10mL/g。