1.本发明公开了基于Ag@Cu‑MOF的尿嘧啶‑DNA糖基化酶电化学传感器制备方法及应用研究,本发明将导电性能较好的Ag和Cu引入MOF材料的合成,提出了一种基于Ag@Cu‑MOF材料实现UDG活性监测的方法。发明中利用水热法合成的Ag@Cu‑MOF材料具有良好导电性和高表面积,可以在100.0mM、pH 7.0的PBS缓冲液(含3,3,5′,5′‑四甲基联苯胺溶液TMB单组份溶液)中较好地催化TMB反应。首先合成携带UDG剪切位点的DNA纳米三棱柱,将该特殊三棱柱修饰到金电极表面,在UDG条件下,尿嘧啶碱基被UDG识别并去除,发卡DNA链由发卡状变成了直链DNA,该直链DNA能够识别发卡H1启动杂交链反应实现发卡H1和H2的交替杂交,随后在电极表面形成的强大的DNA纳米体,我们在H1和H2均设计了一个自由端,这些自由端可以通过π‑π共轭作用多维度“抓住”Ag@Cu‑MOF,构建一个平衡的内稳态环境,较好地催TMB反应,便利反应过程中电子输送及传递实现信号放大,并通过电流‑时间曲线实现UDG的分析检测,而无UDG存在时,能够监测到的电化学信号相对较小,基于此构建了一种新型电化学生物传感器,实现了UDG活性及其小分子抑制剂的灵敏分析。
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2.根据权利要求1所述的生物传感器的制备,通过水热法基于Cu 和四(4‑羧基苯基)卟啉(TCPP)制备二维Cu‑MOF纳米片,其能够作为纳米载体固定检测探针,同时作为信号放大的优异电催化剂。通过将Ag纳米粒子引入Cu‑MOF中,表面积和容量增加的同时增强了电子转移和化学活性。第一次将Ag@Cu‑MOF用于尿嘧啶‑DNA糖基化酶电化学传感器制备,并探测UDG活性及小分子抑制剂。
3.根据权利要求1所述的生物传感器的制备,将UDG的宾肯剪切底物设计到DNA纳米三棱柱结构中,利用UDG的剪切反应引发HCR反应形成多维的DNA纳米体,通过π‑π共轭作用将Ag@Cu‑MOF拉到电极表面形成一个多维稳定的内环境,非常适用于TMB单组分溶液的电催化反应,实现数倍的信号放大,较灵敏地实验了UDG活性的监测。
4.根据权利要求1~3所述的生物传感器的制备,利用UDG的剪切作用、UDG底物链对HCR的引发作用、所形成的DNA纳米体对Ag@Cu‑MOF拉近效应、Ag@Cu‑MOF对TMB单组分溶液的电‑6 ‑5催化作用实现了不同浓度UDG的检测,检测限分别低至2.8×10 U/mL、3.6×10 U/mL;可以实现UDG小分子抑制剂的筛选,IC50分别为0.031U/mL、0.032U/mL。