1.一种尿嘧啶糖苷酶UDG活性的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将发夹探针修饰到金纳米颗粒表面;
(2)均相反应液中UDG酶切反应;
(3)拉曼强度分析:通过检测溶液的拉曼散射光谱进行UDG活性的检测;
所述步骤(1)的步骤为:
S1 取3 nM纳米金溶液;边搅拌边加入拉曼染料溶液;
S2 室温放置20‑40 min,加入修饰了‑SH的发夹探针,混合均匀后,将标记溶液存于冰箱放置;
S3 按照 2 3 μL/次缓慢加入PB缓冲液,搅拌5‑15 min后,然后加入PBS缓冲液;将标记~
溶液存于冰箱放置;
S4 将标记好的纳米金溶液加入灭菌水,离心去除上清液;再加入灭菌水离心,此过程重复两次,保证将未标记的核酸链彻底去除;最后得到标记有发夹探针的纳米金溶液;
所述步骤(2)均相反应液中UDG酶切反应,操作步骤如下:J1配制均相溶液:将标记有发夹探针的纳米金溶液、限制性核酸内切酶IV、外切酶I、NEBuffer和待测物尿嘧啶糖苷酶UDG混合,得到均相溶液;
J2 UDG酶切反应:将J1得到的均相溶液震荡,放入37 ℃的水浴锅中反应;将反应好的溶液从水浴锅中取出,取反应液10 μL用拉曼光谱仪进行检测;
所述的发夹探针,其序列如SEQ ID No:1所示:5’‑SH‑TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCACUCTGCTGTTTTTTCAGCAGAGTG‑3’。