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专利号: 2022105311285
申请人: 中南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-01
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种云南牛蛭线粒体全基因组序列的扩增引物,其特征在于,包括如下14对对引物对:

(1)第1对引物为如SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物;(2)第2对引物为如SEQ ID NO.3所示的上游引物和SEQ ID NO.4所示的下游引物;(3)第3对引物为如SEQ ID NO.5所示的上游引物和SEQ ID NO.6所示的下游引物;(4)第4对引物为如SEQ ID NO.7所示的上游引物和SEQ ID NO.8所示的下游引物;(5)第5对引物为如SEQ ID NO.9所示的上游引物和SEQ ID NO.10所示的下游引物;(6)第6对引物为如SEQ ID NO.11所示的上游引物和SEQ ID NO.12所示的下游引物;(7)第7对引物为如SEQ ID NO.13所示的上游引物和SEQ ID NO.14所示的下游引物;(8)第8对引物为如SEQ ID NO.15所示的上游引物和SEQ ID NO.16所示的下游引物;(9)第9对引物为如SEQ ID NO.17所示的上游引物和SEQ ID NO.18所示的下游引物;(10)第10对引物为如SEQ ID NO.19所示的上游引物和SEQ ID NO.20所示的下游引物;(11)第11对引物为如SEQ ID NO.21所示的上游引物和SEQ ID NO.22所示的下游引物;(12)第12对引物为如SEQ ID NO.23所示的上游引物和SEQ ID NO.24所示的下游引物;(13)第13对引物为如SEQ ID NO.25所示的上游引物和SEQ ID NO.26所示的下游引物;(14)第14对引物为如SEQ ID NO.27所示的上游引物和SEQ ID NO.28所示的下游引物。

2.如权利要求1所述的扩增引物在云南牛蛭线粒体全基因组序列扩增中的应用。

3.一种利用如权利要求1所述的扩增引物扩增云南牛蛭线粒体全基因组序列的方法,其特征在于,包括以提取的云南牛蛭基因组DNA为模板,利用所述的扩增引物进行PCR扩增,所得扩增产物进行琼脂糖电泳检测、测序。

4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,扩增反应体系包括:DNA模板60ng、0.2‑1.0μM引物各1.5μL,2.5mM dNTP 8μL、10×PCR Buffer 5μL、2.0mM MgCl2 1μL、Tap酶0.5μL,余量用无核酸酶水补齐50μL。

5.如权利要求3所述的方法,其特征在于,扩增程序为:94℃预变性2min,94℃变性30s,

55℃退火30s,72℃延伸60s,共35个循环,最后72℃延伸10min。

6.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述扩增产物的核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示。

7.一种扩增云南牛蛭线粒体全基因组序列的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1所述的扩增引物。