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专利号: 201910201612X
申请人: 湖南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种黑金红头鼠线粒体基因组全序列的扩增引物,其特征在于,该扩增引物包括22对引物对:第1对引物对的上游引物F1为:5’–CAGGCATCAGGCACAATCAT–3’,下游引物R1为:5’–CCGGTACACTTACCATGTTACGAC–3’;

第2对引物对的上游引物F2为:5’–GCACGAAGTGGGAAGAAATG–3’,下游引物R2为:5’–GGCCCACTGAAGCGGTAATC–3’;

第3对引物对的上游引物F3为:5’–GCTGGTTGCCTAAGAAGTGG–3’,下游引物R3为:5’–TGGTCGCCCCAACCGAAGAT–3’;

第4对引物对的上游引物F4为:5’–TGATCTGCCCGTGCAGAAGC–3’,下游引物R4为:5’–TGGGTGTGGCGAGAAATAGG–3’;

第5对引物对的上游引物F5为:5’–CGTAGTAGGCCCATTCGGAC–3’,下游引物R5为:5’–TTGGCATTCAGGCACAGCTC–3’;

第6对引物对的上游引物F6为:5’–CCTCGATTCCGCTACGACCA–3’,下游引物R6为:5’–CGAGGTGTGCAATTGATGAG–3’;

第7对引物对的上游引物F7为:5’–AGCCCCATTCGCACTAATCG–3’,下游引物R7为:5’–GCGGGGAAAGTAGATGAATG–3’;

第8对引物对的上游引物F8为:5’–TGAATGCAACCCAGACACTT–3’,下游引物R8为:5’–TAATTCCAGCGGCTAGGACT–3’;

第9对引物对的上游引物F9为:5’–CTCCATCTCGCTGGTGTTTC–3’,下游引物R9为:5’–TAGCGGCGAAGGCTTCTCAT–3’;

第10对引物对的上游引物F10为:5’–CCTTCTTCCCCCAACACTTC–3’,下游引物R10为:5’–TCGGATCGGGGATTCCATTG–3’;

第11对引物对的上游引物F11为:5’–TTAAAGCCATAGGCCATCAA–3’,下游引物R11为:5’–TGGTACTGCAAGGCCTATGT–3’;

第12对引物对的上游引物F12为:5’–CACCCCACTAAACAAGAGCG–3’,下游引物R12为:5’–TCGGTGGCCTTCCATAATGC–3’;

第13对引物对的上游引物F13为:5’–TGGCCCCAACACCAGAACTA–3’,下游引物R13为:5’–TTCCTGAGCCGAAATCAGAG–3’;

第14对引物对的上游引物F14为:5’–CTCCCCGAACCCACCATTAC–3’,下游引物R14为:5’–TTGGTTGCCTCATCGCGTAA–3’;

第15对引物对的上游引物F15为:5’–TCAGCCGCCAACGAACCTAT–3’,下游引物R15为:5’–GTGCCTCGTTGGGTTTTTAG–3’;

第16对引物对的上游引物F16为:5’–GCCAACCTAGCGAATCTAGC–3’,下游引物R16为:5’–GCATCTGCTCGTCCATATCA–3’;

第17对引物对的上游引物F17为:5’–CGCAGACCCCTACATAAACC–3’,下游引物R17为:5’–ATACTGCTGCGAATGAGGTG–3’;

第18对引物对的上游引物F18为:5’–TTGGAAGCCTCGCATTAACC–3’,下游引物R18为:5’–AGCGGTGTGATGGTATTGTG–3’;

第19对引物对的上游引物F19为:5’–CGCACAAATCACCAACACTC–3’,下游引物R19为:5’–GATTACTGTGGCGCCTCAGA–3’;

第20对引物对的上游引物F20为:5’–CCAACGGAGCTTCCTTCTTC–3’,下游引物R20为:5’–TTCTAGTCATCCGGTTGCAG–3’;

第21对引物对的上游引物F21为:5’–ACATGAATCGGCGGAATACC–3’,下游引物R21为:5’–AAGAATGCTCGGCATGGTGG–3’;

第22对引物对的上游引物F22为:5’–GGCATCTGGTTCCTATCTGA–3’,下游引物R22为:5’–GTGGCTGGCACGAATTTTAC–3’。

2.根据权利要求1所述的黑金红头鼠线粒体基因组全序列的扩增引物,其特征在于,所述扩增引物是根据GenBank数据库中收录的黑躯兵鲶(Corydoras rabauti)线粒体全基因组序列设计得到。

3.一种对黑金红头鼠线粒体基因组全序列扩增的方法,其特征在于,该方法是以提取的黑金红头鼠肌肉组织总DNA为模板,分别用权利要求1所述的22对引物对进行PCR扩增,扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳检测后进行测序及序列拼接。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述PCR的反应体系为50μL,其中:1μL DNA模板、1μL 10μM上游引物、1μL 10μM下游引物、1μL 10mM dNTP、5μL 10×不含Mg2+的PCR Buffer、5μL 25mM MgCl2、0.5μL 5U/μL Taq酶及35.5μL无核酸酶水。

5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述PCR扩增条件为:95℃预变性3min,然后94℃变性45s,56℃退火1min,72℃延伸90s,共35个循环,最后72℃延伸8min。

6.根据权利要求3所述方法获得的黑金红头鼠线粒体基因组全序列,其特征在于,该线粒体基因组长度为16667bp,全基因组序列包含2个核糖体RNA基因,13个不含内含子的蛋白编码基因,22个转运RNA基因和2个非编码区(控制区和轻链复制起始区)。