1.大眼鳜sIgM基因全长cDNA序列的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：总RNA提取和第一链cDNA的合成：

S1.根据动物组织总RNA试剂盒说明书提取大眼鳜总RNA，选用经电泳和紫外分析检测条带清晰、完整性好的RNA用于反转录；

S2.以总RNA为模板，按照反转录试剂盒说明书合成cDNA第1链，所得cDNA于‑20℃保存备用；

步骤二：IgM基因恒定区部分序列的扩增：

S1.设计引物，根据NCBI中已知硬骨鱼类免疫球蛋白IgM基因保守区的cDNA序列设计引物IgM‑F，IgM‑R；

S2.以第一链cDNA为模板进行PCR扩增，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后，将所得目的条带回收，利用；

S3. 将经PCR扩增后的cDNA序列与PMD‑19T载体连接，转化至大肠杆菌DH5α中，经菌落PCR鉴定后，测序；

步骤三：IgM全长cDNA的扩增：

S1.新提取完整性好的大眼鳜头肾RNA，利用SMARTer RACE 5'/3'Kit试剂盒反转录获得RACE模板；

S2.根据已获得的中间片段设计5＇和3＇RACE引物，与UPM扩增大眼鳜IgM cDNA的5＇和3＇端；

S3.将扩增后的产物经PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后，用胶回收试剂盒纯化后与pRACE载体连接，转化到大肠杆菌DH5α株，菌落PCR检测阳性后测序；

S4.将已获得的RNA片段、cDNA片段用DNAstar软件进行拼接并进行序列分析与比对，获得大眼鳜sIgM基因全长cDNA序列，设计sIgM基因ORF引物对sIgM基因序列进一步的进行验证；

步骤四：序列分析：

S1.使用在线软件 open reading frame finder预测氨基酸序列并寻找ORF；

S2.用Blasten工具在GenBank中搜索sIgM同源序列，并使用UniProt and SMART对氨基酸结构域进行标注；

S3.根据氨基酸序列结构，使用NJ法构建系统进化树；

步骤五：实时荧光定量PCR：

S1.分别取大眼鳜头肾、脾脏、肝脏、鳃、肠、中肾、皮肤、脑、心，液氮速冻后，利用动物组织总RNA试剂盒提取总RNA，并用Prime Script RT reagent Kit with gDNA Eraser试剂盒反转录得到cDNA模板；

S2.根据已获得的sIgM重链基因cDNA序列设计荧光定量PCR引物，以β‑actin基因为内参基因，利用SYBR Premix Ex Taq Ⅱ试剂盒对cDNA序列进行扩增；

S3.通过实时荧光定量PCR检测sIgM基因在大眼鳜不同组织中的表达，目的基因相对表达量的计算釆取ΔΔCT法；

得到大眼鳜sIgM基因的cDNA序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根据权利要求1所述的大眼鳜sIgM基因全长cDNA序列的扩增方法，其特征在于，步骤二S2所述的PCR扩增条件为：S1. 95 °C，预变性 5min；

S2. 94°C变性30s, 94°C变性30s，54°C退火30 s, 72°C延伸 1min, 共30个循环；

S3. 72 °C 延伸 10min。

3.根据权利要求1所述的大眼鳜sIgM基因全长cDNA序列的扩增方法，其特征在于，步骤三所述PCR扩增的反应条件为：S1.94℃变性5min；

S2. 94℃变性 30s，72℃ 延伸2min ，5个循环；

S3. 94℃ 变性30s，70℃复性 30s，72℃延伸 2min，5个循环；

S4. 94℃变性 30s ，68℃复性 30s，72℃延伸2min，25个循环；

S5.72℃延伸8min，4℃终止。

4.根据权利要求1所述的大眼鳜sIgM基因全长cDNA序列的扩增方法，其特征在于，步骤五S2所述的PCR扩增条件为：S1. 95 °C，预变性30 s；

S2. 94 °C 变性 5 s，56 °C退火30 s, 72 °C延伸30 s, 共40个循环。

5. 根据权利要求1所述的大眼鳜sIgM基因全长cDNA序列的扩增方法，其特征在于，扩增得到的大眼鳜sIgM基因的sIgM 重链基因cDNA序列全长为1952 bp，其中起始密码子ATG的上游有49bp非编码区，终止密码子ATT下游有包含Poly A在内的151bp非编码区序列，开放阅读框长1752 bp；所述Poly A上游20bp处是Poly A终止信号AATAAA。

6. 根据权利要求5所述的大眼鳜sIgM基因全长cDNA序列的扩增方法，其特征在于，扩增得到的大眼鳜sIgM 重链基因cDNA序列还包括583个氨基酸，所述氨基酸包括一个可变区V，四个恒定区Cμ1‑Cμ4；所述可变区V包括4个骨架区FR和3个互补决定区CDR；在骨架区FR和互补决定区CDR内，共存在11个半胱氨酸和10个色氨酸保守位点。

7.根据权利要求1所述的大眼鳜sIgM基因全长cDNA序列的扩增方法，其特征在于，经步骤一—步骤五得到的sIgM基因在大眼鳜各组织中均有表达，但各组织间的表达水平存在较大差异，各组织中表达量从高往低依次为头肾、脾脏、肝脏、心、皮肤、鳃、中肾、肠、脑；其中头肾和脾脏中的IgM基因表达量明显高于其他组织。