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专利号: 2022102927717
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.尖孢镰刀菌黄瓜专化型LAMP引物组,其特征在于,包括如下引物:F3:5’‑CGGATCTCTTGGTTCTGGC‑3’;

B3:5’‑TGGAAGCTCGACGTGACC‑3’;

FIP:5’‑GGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTGAAGAACGCAGCAAAATGC‑3’;

BIP:5’‑TGCCTGTTCGAGCGTCATTTCACGAATTAACGCGAGTCCCA‑3’;

LB:5’‑ACCCTCAAGCACAGCTTGGT‑3’。

2.权利要求1所述尖孢镰刀菌黄瓜专化型LAMP引物组在检测尖孢镰刀菌黄瓜专化型中的应用。

3.一种尖孢镰刀菌黄瓜专化型LAMP检测试剂盒,其特征在于,包含以下试剂:20×引物混合液、尖孢镰刀菌黄瓜专化型基因组DNA、2×LAMP MagicMix及灭菌超纯水;

所述20×引物混合液中含有权利要求1所述的尖孢镰刀菌黄瓜专化型LAMP引物组。

4.根据权利要求1所述的尖孢镰刀菌黄瓜专化型LAMP检测试剂盒,其特征在于,所述20×引物混合液中各引物的浓度如下:FIP 32μM、BIP 32μM、F3 4μM、B3 4μM、LB 8μM。

5.根据权利要求1所述的尖孢镰刀菌黄瓜专化型LAMP检测试剂盒,其特征在于,所述2×LAMP MagicMix中含有DNA聚合酶、蓝色DNA示踪染料、反应缓冲液。

6.权利要求3所述的尖孢镰刀菌黄瓜专化型LAMP检测试剂盒在检测尖孢镰刀菌黄瓜专化型中的应用,其特征在于,包括如下步骤:(1)提取待测样品基因组DNA;

(2)LAMP反应:

扩增反应体系:权利要求2所述的20×引物混合液1μL、步骤(1)提取的待测样品基因组DNA 2μL、2×LAMP MagicMix 10μL,补灭菌超纯水至20μL,并以尖孢镰刀菌黄瓜专化型基因组DNA作为阳性对照,以灭菌超纯水作为阴性对照,反应程序为:65℃恒温50min;

(3)反应结束后观察颜色的变化:若反应结束后反应液呈蓝色,则待测样品含有尖孢镰刀菌黄瓜专化型;

若反应结束后反应液呈无色或极浅蓝色,则待测样品不含尖孢镰刀菌黄瓜专化型。