1.番茄灰霉病菌LAMP检测引物,其特征在于,其核苷酸序列为:F3: 5’- AGCTTGTCGACCAAGTTCTT-3’,B3: 5’- ACGGTATCGGAAACCTTTGG-3’,FIP: 5’- CCACCACCGAGAGAGTGGGTAATCGTGAAGCTGAAGGCTGT-3’,BIP: 5’- TCTCCAAGATCCGCGAGGAGTCGATGGGACGACGGAGAA- 3’。
2.一种利用权利要求1所述引物制备的番茄灰霉病菌LAMP检测试剂盒,其特征在于,其组分为:一对外侧引物F3/B3、一对内侧引物FIP/BIP、LAMP反应混合液、8U Bst聚合酶以及核酸染料1000×SYBR Green I。
3.如权利要求2所述的一种番茄灰霉病菌LAMP检测试剂盒,其特征在于,所述LAMP反应混合液由40 mM Tris-HCl,20 mM (NH4)2SO4,20 mM KCl,16 mM MgSO4,1.6 mol/L甜菜碱,
2.0 mM dNTPs和0.2% Trion X-100组成。
4.一种利用权利要求2所述番茄灰霉病菌LAMP检测试剂盒检测番茄灰霉病菌的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)提取待测样品DNA;
(2)LAMP反应体系配制:以步骤(1)提取的DNA为模板,在PCR管中制备25μl反应体系,其包括5μM外侧引物F3和B3各1.0μL,40 μM内侧引物FIP和BIP各1.0μL,LAMP反应混合液12.5μL,8 U Bst聚合酶1.0 μL,DNA模板1.0 μL,用灭菌超纯水补足至25μL;
(3)LAMP 反应:将步骤(2)中PCR 管于63.5℃恒温反应60min ;
(4)分析判断反应产物结果:待LAMP反应结束后,在步骤(3)中所得反应产物中加入1.0 μl SYBR green Ⅰ核酸染料,显色结果观察到绿色荧光的判断为阳性,存在番茄灰霉病菌;
橙色或橘黄色判断为阴性,不存在番茄灰霉病菌。
5.利用权利要求1所述的番茄灰霉病菌LAMP检测引物在番茄灰霉病的早期诊断和病菌的监测、鉴定上的应用。
6.利用权利要求2所述的番茄灰霉病菌LAMP检测试剂盒在番茄灰霉病的早期诊断和病菌的监测、鉴定上的应用。