1.黄瓜炭疽病菌LAMP检测引物,其特征在于,其核苷酸序列为:F3: 5’- GGGGCTAACTGCTTGAACAG -3’,B3: 5’- GGTGCCGT TGTACCTGTT -3’,FIP: 5’- TGTGCGAAGCATCGTTGCCGGGTAACCAGATTGGTGCTGC -3’,BIP: 5’- AGGCAAAACATCTCTGGCGAGCCCATTCTTGACGTGGCCTTA - 3’。
2.一种利用权利要求1所述引物进行黄瓜炭疽病菌LAMP检测的方法,其特征在于,包括以下具体步骤:(1)提取待测样品基因组DNA;
(2)LAMP反应体系的建立:LAMP检测反应体系为25 μL,以步骤(1)提取的DNA为模板, 反应体系包括5 μM F3和B3各1.0 μL,40 μM FIP和BIP各1.0 μL,LAMP反应混合液12.5μL,8 U Bst聚合酶1.0 μL,DNA模板1.0 μL,用灭菌超纯水补足至25μL;
(3)LAMP反应条件:63.5 ℃温育60 min,85℃灭活5min;
(4)反应结果的测定:采用荧光染料目测观察法或琼脂糖凝胶电泳法进行测定:采用荧光染料目测观察法,待LAMP反应结束后,在LAMP反应的扩增产物中加入显色剂SYBR green Ⅰ 1.0 μL,显色结果观察到绿色荧光的判断为阳性,橙色或橘黄色判断为阴性;
采用琼脂糖凝胶电泳法,取2.0 μL LAMP扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测,如出现梯形条带判断为阳性,没有出现条带则判断为阴性。
3. 如权利要求2所述的一种黄瓜炭疽病菌LAMP检测方法,其特征在于,所述的LAMP反应混合液由以下组分组成:40 mM Tris-HCl,20 mM (NH4)2SO4,20 mM KCl,16 mM MgSO4,
1.6 mol/L甜菜碱,2.0 mM dNTPs,0.2% Trion X-100。
4.利用权利要求1所述的黄瓜炭疽病菌LAMP检测引物在黄瓜炭疽病菌的早期诊断和病菌的监测、鉴定上的应用。
5.利用权利要求2所述的黄瓜炭疽病菌LAMP检测方法在黄瓜炭疽病菌的早期诊断和病菌的监测、鉴定上的应用。