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专利号: 2022101281789
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2024-10-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于纳米酶的比色检测卡那霉素的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)CuWO4纳米材料的合成:常规方法制备CuWO4纳米材料粉末;

(2)合成PMSN:制备介孔二氧化硅MSN,随后使用含有胺基的硅烷对MSN进行表面改性,得到带正电的MSN,即为PMSN;

3‑

(3)制备负载[Fe(CN)6] 的适配体包裹的PMSN:将制备好的PMSN分散到K3[Fe(CN)6]溶

3‑

液中,孵育后加入KANA适配体,进行包裹,得到负载[Fe(CN)6] 的适配体包裹的PMSN悬浮液;KANA适配体序列如SEQ ID NO.1所示;

3‑

(4)吸光度的测定:将上述负载[Fe(CN)6] 的适配体包裹的PMSN悬浮液与不同已知浓度的卡那霉素溶液混合,孵育后加入DNase I反应缓冲液和DNase I反应;随后加入步骤(1)制备的CuWO4纳米材料粉末的悬浊液,并依次加入HAc‑NaAc缓冲液、TMB和H2O2,反应完成后在640‑660nm处测量吸光度;

(5)线性模型的构建:通过步骤(4)所得的不同已知卡那霉素浓度的吸光度值A,和卡那霉素浓度为0的样品所得的吸光度值A0,计算得到不同浓度相应的吸光度差值A‑A0;然后利用不同已知卡那霉素浓度的对数值和相应的吸光度差值构建线性模型;

(6)未知卡那霉素溶液浓度的测定,利用步骤(5)获得的线性模型,重复步骤(4)测定未知卡那霉素溶液的浓度。

2.根据权利要求1所述的基于纳米酶的比色检测卡那霉素的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述CuWO4纳米材料的合成包括以下具体步骤:将Cu(NO3)2·3H2O溶解在去离子水中,用碱液调整溶液的pH值为4.0‑6.0,并在50‑80℃下搅拌10‑50分钟;加入Na2WO4·2H2O,在70‑100℃下连续搅拌30‑60分钟;冷却到室温后,用水和乙醇依次洗涤,然后在50‑70℃下干燥8‑16小时,得到的产品在300‑500℃下退火1‑3小时,得到CuWO4纳米材料粉末。

3.根据权利要求2所述的基于纳米酶的比色检测卡那霉素的方法,其特征在于,所述Cu(NO3)2·3H2O与Na2WO4·2H2O的质量比为1:1‑2:7。

4.根据权利要求1所述的基于纳米酶的比色检测卡那霉素的方法,其特征在于,步骤(2)中,合成PMSN包括以下具体步骤:首先将十六烷基三甲基溴化铵CTAB溶于去离子水,然后将NaOH溶液加入上述溶液中,并在40‑70℃下搅拌10‑50分钟;

随后,将正硅酸四乙酯TEOS慢慢滴入上述溶液中,在70‑90℃下搅拌4‑8小时后,将混合物用水和乙醇分别洗涤数次;接着,将洗涤后产物在50‑70℃下干燥8‑16小时后在500‑600℃下退火4‑8小时,以去除粗制MSN样品中多余的表面活性剂,制得介孔二氧化硅MSN;

接着用含有胺基的硅烷对MSN进行表面改性,得到带正电的MSN,命名为PMSN。

5.根据权利要求4所述的基于纳米酶的比色检测卡那霉素的方法,其特征在于,CTAB与TEOS的质量比为1:4‑6;

所述对MSN进行表面改性的方法为:将MSN分散于无水乙醇中,并超声处理,随后,慢慢滴入3‑氨基丙基三乙氧基硅烷APTES,并在室温下持续搅拌6‑10小时;然后,将混合物用水和乙醇交替洗涤;最后,在50‑70℃下干燥8‑16小时后得到PMSN粉末;MSN与APTES的质量比为1:15‑25。

6.根据权利要求1所述的基于纳米酶的比色检测卡那霉素的方法,其特征在于,步骤

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(3)中,制备负载[Fe(CN)6] 的适配体包裹的PMSN包括以下具体步骤:将PMSN分散到K3[Fe(CN)6]溶液中,将混合物在20‑30℃下晃动8‑16小时,然后向上述悬浮液中加入KANA适配

3‑

体;在20‑30℃下晃动2‑6小时后,用Tris‑HCl缓冲液洗涤;随后,将负载[Fe(CN)6] 的适配体包裹的PMSN重新悬浮于Tris‑HCl缓冲液中;PMSN:K3[Fe(CN)6]的质量之比为:25‑15:1;

PMSN重新悬浮的浓度为4‑8mg/mL。

7.根据权利要求1所述的基于纳米酶的比色检测卡那霉素的方法,其特征在于,步骤

3‑

(4)中,吸光度的测定包括以下具体步骤:将负载[Fe(CN)6] 的适配体包裹的PMSN悬浮液与不同已知浓度的卡那霉素溶液混合,并在30‑40℃下摇晃孵育10‑50分钟;接着加入DNase I反应缓冲液和DNase I,在30‑40℃下不断摇晃孵育0.5‑2小时;随后,加入CuWO4悬浮液,反应1‑10分钟,然后依次加入HAc‑NaAc缓冲液、TMB和H2O2;最后,在40‑50℃下反应10‑50分钟,在640‑660nm处测量吸光度。

8.如权利要求1‑7任一项所述的方法在食品安全检测中的应用。

9.一种基于纳米酶的比色检测卡那霉素的试剂盒,其特征在于,包含有权利要求1‑7任

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一项所述方法中的负载[Fe(CN)6] 的适配体包裹的PMSN悬浮液。

10.一种权利要求9所述试剂盒的应用,其特征在于,应用于食品安全检测。