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专利号: 2022100580586
申请人: 湖南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种非洲猪瘟病毒抗原重组串联表位蛋白,其特征在于,由非洲猪瘟病毒CD2v蛋白与MGF360‑505R蛋白的B细胞表位以柔性肽串联后形成,其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种如权利要求1所述的非洲猪瘟病毒抗原重组串联表位蛋白的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:将所述非洲猪瘟病毒抗原重组串联表位蛋白的编码基因进行XhoI及XbaI酶切位点酶切后,利用T4 DNA连接酶将酶切后的基因片段亚克隆至pET28a载体,构建重组质粒,然后使用大肠杆菌BL21进行表达,得到非洲猪瘟病毒抗原重组串联表位蛋白。

3.根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,所述非洲猪瘟病毒抗原重组串联表位蛋白的编码基因通过以下方法设计筛选得到:用python运行程序对非洲猪瘟病毒p30蛋白、p72蛋白、CD2v蛋白、MGF360‑505R蛋白的B细胞表位以柔性肽串联并进行自动化排列组合,然后利用蛋白可溶性预测工具对自动化排列组合形成的序列逐一进行蛋白可溶性预测,根据需求筛选蛋白可溶性预测值合格的蛋白序列,通过分析得到其编码基因。

4.根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,所述非洲猪瘟病毒抗原重组串联表位蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

5.一种基于权利要求1所述或由权利要求2‑4中任一项所述构建方法得到的非洲猪瘟病毒抗原重组串联表位蛋白的抗体ELISA检测试剂盒,其特征在于,包括:包被有抗原的96孔可拆卸酶联反应板、阳性对照血清、阴性对照血清、辣根过氧化物酶标记的羊抗猪二抗、PBST洗涤液、TMB显色液和终止液。

6.根据权利要求5所述的抗体ELISA检测试剂盒,其特征在于,所述阳性对照血清为所述非洲猪瘟病毒抗原重组串联表位蛋白的免疫血清,所述阴性对照血清为无特定病原体的猪血清,所述辣根过氧化物酶标记的羊抗猪二抗由其原液按1:7000倍体积稀释得到,所述PBST洗涤液为含有0.05%吐温20的0.01mol/L、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液,所述终止液为

2mol/L的硫酸溶液。