1.一种用于EB病毒衣壳抗原和核抗原1蛋白抗体联合检测的蛋白质芯片,其特征在于:
所述蛋白质芯片用于人血清中EB病毒衣壳抗原IgM抗体、衣壳抗原IgG抗体和核抗原1蛋白IgG抗体的联合检测;所述蛋白质芯片是在固相载体表面点阵固定有EB病毒衣壳抗原探针和EB病毒核抗原1蛋白探针;所述固相载体为S-S-PEG-COOH化学修饰的金箔芯片,在所述S-S-PEG-COOH上用EDC和NHS活化羧基以固定特异性抗原为探针。
2.一种权利要求1所述的用于EB病毒衣壳抗原和核抗原1蛋白抗体联合检测的蛋白质芯片的制备方法,其特征在于按如下步骤进行:步骤1、对金箔芯片进行表面化学修饰,获得固相载体
以浓度为2mM的DT2的乙醇溶液为修饰液1;将NHS和EDC溶于0.1M的MES缓冲液中作为修饰液2,在所述修饰液2中NHS浓度为50mM、EDC浓度为200mM;
对金箔芯片进行清洗后,浸入所述修饰液1中,黑暗条件下室温摇荡孵育3小时,取出后用无水乙醇溶液清洗、氮气吹干;然后再以所述修饰液2点样孵育0.5小时,取出后用PBST溶液清洗、氮气吹干,获得固相载体待用;
所述PBST溶液是由浓度0.01M、pH=7.4的磷酸缓冲液PBS与Tween 20混合配置而成的,在所述PBST溶液中Tween20的体积浓度为0.1%;
步骤2:固定EB病毒抗原探针
将衣壳抗原溶于PBST-BSA溶液中,配制浓度不低于50μg/mL的衣壳抗原溶液;
将核抗原1蛋白溶于PBST-BSA溶液中,配制浓度不低于6.25μg/mL的核抗原1蛋白溶液;
将所述衣壳抗原溶液点样孵育于固相载体的奇数行,将核抗原1蛋白溶液点样孵育于固相载体的偶数行,室温孵育2h,使固相载体的奇数行包被EB病毒衣壳抗原探针、偶数行包被EB病毒核抗原1蛋白探针;取出后将芯片浸没在1M乙醇胺中15分钟,以封闭剩余的已活化羧基;最后再用PBST溶液清洗、氮气吹干,即获得用于EB病毒衣壳抗原和核抗原1蛋白联合检测的的蛋白质芯片;
所述PBST-BSA溶液是由浓度0.01M、pH=7.4的磷酸缓冲液PBS、Tween20及胎牛血清BSA混合构成,在所述PBST-BSA溶液中Tween20的体积浓度为0.1%,胎牛血清BSA的质量浓度为
0.1%。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:步骤1对金箔芯片进行清洗的方法为:
将NH3、H2O2及H2O按体积比1:1:5混合构成TL1清洗液,将金箔芯片浸入盛有TL1清洗液的不锈钢清洗盒内,82℃水浴6分钟,清洗2次,取出之后用超纯水冲洗,再用无水乙醇清洗,最后用氮气吹干。
4.一种权利要求1所述用于EB病毒衣壳抗原和核抗原1蛋白联合抗体检测的蛋白质芯片的使用方法,其特征在于:将Cy3标记驴抗人IgG抗体溶于PBST-BSA溶液中,构成浓度2.5μg/mL的IgG荧光二抗溶液;将Cy5标记羊抗人IgM抗体和Cy3标记驴抗人IgG抗体共同溶于PBST-BSA溶液中,构成浓度各为2.5μg/mL的IgM+IgG荧光二抗溶液;
将待检测患者血清稀释10~80倍,然后分别点样于所述蛋白质芯片任意一个奇数行的EB病毒衣壳抗原探针和一个偶数行的EB病毒核抗原1蛋白探针上,常温条件下孵育抗体1小时,取出后用PBST溶液清洗、氮气吹干;
将所述IgM+IgG荧光二抗溶液和所述IgG荧光二抗溶液分别点样于孵育有抗体的EB病毒衣壳抗原探针和EB病毒核抗原1蛋白探针之上,室温孵育1小时,然后用PBST溶液清洗、氮气吹干;
若EB病毒衣壳抗原探针处呈现荧光色,则待测患者血清中含有衣壳抗原IgM抗体和/或衣壳抗原IgG抗体,若EB病毒衣壳抗原探针处无荧光色,则待测患者血清中不含有衣壳抗原IgM抗体和衣壳抗原IgG抗体;
若EB病毒核抗原1蛋白探针处呈现荧光色,则待测患者血清中含有核抗原1蛋白IgG抗体,若EB病毒核抗原1蛋白探针处无荧光色,则待测患者血清中不含有核抗原1蛋白IgG抗体;
所述PBST溶液是由浓度0.01M、pH=7.4的磷酸缓冲液PBS与Tween 20混合配置而成的,在所述PBST溶液中Tween20的体积浓度为0.1%;
所述PBST-BSA溶液是由浓度0.01M、pH=7.4的磷酸缓冲液PBS、Tween20及胎牛血清BSA混合构成,在所述PBST-BSA溶液中Tween20的体积浓度为0.1%,胎牛血清BSA的质量浓度为
0.1%。
5.一种用于EB病毒衣壳抗原和核抗原1蛋白联合检测的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒内包含有:权利要求1所述的蛋白质芯片;PBST-BSA溶液;将Cy3标记驴抗人IgG抗体溶于PBST-BSA溶液中,构成的浓度2.5μg/mL的IgG荧光二抗溶液;将Cy5标记羊抗人IgM抗体和Cy3标记驴抗人IgG抗体共同溶于PBST-BSA溶液中,构成的浓度各为2.5μg/mL的IgM+IgG荧光二抗溶液;
所述PBST-BSA溶液是由浓度0.01M、pH=7.4的磷酸缓冲液PBS、Tween20及胎牛血清BSA混合构成,在所述PBST-BSA溶液中Tween20的体积浓度为0.1%,胎牛血清BSA的质量浓度为
0.1%。