1.一种基因,其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种重组载体,其特征在于:它包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列;优选地,所述重组载体是重组pGEX‑6P‑1。
3.一种重组菌,其特征在于:它包含权利要求2所述的重组载体;优选地,所述重组菌为重组大肠杆菌;更优选地,所述重组大肠杆菌为重组Transetta(DE3)。
4.一种制备氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白的方法,其特征在于:它是采用权利要求3所述的重组菌发酵制得的。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:(1)取重组菌,活化,扩增,得活化菌液;
(2)将活化菌液接种到培养基中培养,3~4小时后加入诱导剂诱导表达,收集菌体;
(3)取菌体,破菌,离心,取上清纯化后得到氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白。
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6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述活化菌液的浓度为1×107
~1×10cfu/ml;
步骤(2)中,所述活化菌液与培养基的体积比为1:(10~100),所述培养基为含抗生素的LB培养基,所述培养的温度为30~40℃,所述诱导剂为IPTG诱导剂,所述诱导表达的温度为15~25℃,诱导表达的时间为8~16小时;
步骤(3)中,所述纯化方法为GST标签融合蛋白纯化方法。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述活化菌液与培养基的体积比为1:50,所述抗生素的为氨苄西林,所述培养的温度为37℃,所述诱导表达的温度为20℃,诱导表达的时间为10~14小时;
步骤(3)中,所述纯化方法为:取上清上树脂柱,穿流2次;先用Lysis buffer冲洗树脂去除杂蛋白;然后用还原型谷胱甘肽溶液洗脱,得蛋白。
8.一种生产高产矢车菊素3‑O‑丙二酰葡萄糖苷转基因植物的方法,其特征在于,它是将权利要求1所述基因转入植物中,获得表达氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示蛋白的植物。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述转入植物的方法是农杆菌法、基因枪法、电转法、PEG介导法、脂质体法、磷酸钙‑DNA共沉淀法中的一种;所述植物为烟草或青稞。
10.权利要求1所述基因、权利要求2所述重组载体、权利要求3所述重组菌在制备高产矢车菊素3‑O‑丙二酰葡萄糖苷转基因植物中的用途;所述植物优选为烟草或青稞。